快速细菌检验方法

1、前言

　　水的微生物学上的卫生状态是以大肠菌群或希氏大肠菌评价的。但现今采用的检验方法（以下称现有法），从判断试验、确认试验到全面试验得到最终结果，在阴性的场合试验时间为2 日，阳性的场合要达到确认试验为4日，完成全面试验则需要5 日。从而，在确定原水受污染以前，污染的水就会被居民饮用，给居民增加很大的负担。另外以现有法检验对象的大肠菌存在于自然环境中，直接与人体健康有害的作为指标的细菌，特别是埃希氏大肠菌的试验，还没有快速且准确的良好检出试验方法。最近新的试验方法已被开发出来。这种方法能够在24小内将大肠菌和埃希氏大肠菌同时检出，相当实用。其概要叙述如下：

　　2、试验方法和试验研究目的

　　这种方法是在临床实验室中以特定基质法概念作为基础，将尿中微生物识别出来。作为试验目的远规定的这一方法，单单只是利用细菌繁殖的仅有特定的基质这一点而言，就与现有法不同。其培养剂是硫酸铵（氨素来源）、盐类维他命、加上两种加水有分解可能的基质，这两种基质及作用为，（1）利用邻-硝基苯-半乳糖吡喃苷加水分解反应，使大肠菌群由无色变成黄色，（2）利用场-甲基伞形苯-葡萄酸苷加水分解反应使埃希氏大肠菌发出明显萤光。这种生物反应化学的反应机理非常特别，因此不需要做确认试验。
　　 为了把此方法在供水上应用于检测细菌，在供水研究基金会和美国环保局支持下，进行了法和当前使用的多管发酵管法及滤膜法调查比较。本次研究的目标有以下12项。
　　 *大肠菌群及埃希氏大肠菌以cfu/100ml的浓度检出。
　　 *存在于起始浓度的菌类，在4-24小时内有确认结果。
　　 *在没有做大肠菌和埃希氏大肠菌的确认试验及识别试验的情总况下，能同时定量。
　　 *规定用埃希氏大肠菌认定。
　　 *不受HPC细菌妨害。
　　 *总费用减少。调整完毕后的试药即使不冷藏也可长期保存。
　　 *在肠菌群繁殖和目标微生物代谢呈色的反应等相当明确，不需要有确认追加试验。
　　 *有否试验必要计数的场合，能用法试验。
　　 *试验方法掌握简单。
　　 *小型供水及大型供水用此方法都适当。
　　 在经同意此调查的多数供水事业单位合作下，进行了广泛的调研。试样由所有配水系统采取。

　　3、结果

　　不论使用法或法的哪一种手段，当今使用的方法和法，在统计上都没有意义的差别。两种方法决定系数0.78,认为有很高的相关系统数。从而两种方法所得结果，在质上其数据基底是相同的。因此，供水事业单位虽然改用法，当前使用的数据库依然能够有效。
　　 以法的阳性管做二次培养，调查是否存在目标微生物。但在以法为阳性场合，必定存在有作为目标的微生物，因此，不必做确认试验。　

　　４、考察

　　由于法的特殊优越性，已在使用上证明有着充分的感应效果。所以美国环保局于1992年在施行的新规则中、认定了此新的大肠菌群和埃希氏大肠菌的检测方法，并已于标准法18版刊载。有几个重要优点。因为现有法必须以乳糖为基本培养剂，其做确认试验得到结果要用几天时间，而法在于24小时以内就可确认结果，适时的得到净水微生物情况的水质情报，因此就可大大的节省经费。水质试验室已有做大肠菌群试验的细菌培养箱，因此要添设的必要设备，只需要添设廉价紫外线灯而已。随之在人员雇用经费的节约上，由于在培养调整，试样分析，确认试验，洗刷试验器具等方面，使试验室人员操作的便利性有所提高。分析时向节约解决了新规则需要增加的试样数量和复杂的要求。
　　其他的优点是，用这种方法的以粪便性大肠菌群做的试验，没有受到假阳性的温度耐性的克雷伯氏菌属的妨害。供水事业单位在大肠菌群试验为阳性的场合下，在整体上，由于行使粪便性微生物（粪便性大肠菌或埃氏大肠菌）试验要求，所以有此种克雷氏菌属的繁殖，必须向管理居民健康的监督官报告。普通见到的一种大肠菌群的克雷伯氏菌属，有约法三章15%的有着温度耐性。因此这样事态经常发生。克雷伯氏菌属虽常存在饮用水中，但对人体健康无害处，由于证明携带这种菌的式样，对饮用者健康没有风险，因此也就没有再采样与再试验的必要性。这种方法已有多数国家开始应用，并利用其于发国家地区水道调查，飓风和地震后的水质评价，供水管道更新后配水系统污染评价等。
　　 在这种有利的情况下，法就成为给水新型的分析手段，它增强了效率，并是投资少收效高的微生物水质监测方法。此试验方法于数年内，在供水事业单位和有关涉及健康的组织普及，而未发生误码差（本杂志1989-1有详细介绍）。
　　 在会议中，除此以外，还利用根据将共同存在于肠内细菌科的细菌抗原检出的新免疫学法，迅速检出肠内细菌科的细菌的方法，作为迅速试验方法的提案提出。
　　这种方法由医科大学和给水研究所共同研究开发，它是以乳糖、胨、肉汤繁殖细菌培养以后，将存在于外膜的氨基糖连续链结合——葡萄糖——磷脂酰残基（与肠内细菌科共同而且仅限定于此的特异病原），以抗体的免疫学的方法检出。检验利用多层的用4小时完成。检验范围105——106细菌数/ml，必须有前培养程序。它是在整个试验时间24小时，在100 ml中检出1个埃希氏大肠菌或1 个大肠菌群的方法。
　　 此方法在给水实际运行当中很适合应用，并已得出良好的效果。