自1994年转基因大豆在美国获准商业化生产以来，全球转基因大豆的种植面积迅猛增加，由1996年的50万公顷上升到2007年的5860万公顷，占转基因作物总种植面积的57％以上，其中尤以抗草甘膦的转EPSPS基因大豆的种植面积最大。抗草甘膦转基因大豆的种植使田间杂草防除简单易行，可以大幅度降低生产成本，提高经济效益，种植转基因大豆已 成为世界大豆生产发展的主流趋势。下面介绍的方法适用转基因抗草甘膦大豆及其产品、转基因抗草丁膦大豆及其产品、转基因高油酸大豆及其产品，包括大豆种子、大豆、豆粕、大 豆粉、大豆油及其他大豆制品中转基因成分的定性PCR检测。

一、检测原理

针对转基因抗草甘膦大豆(GTS 40-3-2)含有的CaMV35S启动子、NOS终止子、矮牵牛花的CTP4、CT4-基因以及大豆内标准基因lectin，设计特异性引物进行PCR扩增，以检测试样中是否含有转基因抗草甘膦大豆的成分。转基因抗草丁膦大豆和转基因高油酸大豆含有共同的元件CaMV35S启动子基因以及内标准基因lectin，用上述引物进行PCR扩增以检测试样中是否含有转基因抗草丁膦大豆和转基因高油酸大豆的成分。

二、试剂与材料

溴代十六烷基三甲胺、三羟甲基氨基甲烷、二水乙二胺四乙酸二钠、2一巯基乙醇、异丙醇、异戊醇、三氯甲烷+异戊醇(24+1)、76％乙醇溶液(取760mL无水乙醇，加水定容至1L)、70％乙醇(取700mL无水乙醇，加水定容至1L)、石蜡油、DNA分子量标准(DNA moiecular weight marker)。

各10mmol／L的四种脱氧核糖核苷酸(dATP，dCTP，dGTP，dTTP)混合溶液。

10mol／L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠80g，先用160mL水溶解后，再加水定容到200rnL。

500mmol／L乙二胺四乙酸二钠溶液：称取乙二胺四乙酸二钠18．6g，加入70mL水中，再加入10mol／L NaOH溶液，加热溶解后，冷却至室温，再用10mol／L NaOH溶液调pH至8.0，用水定容到100mL，在103.4kPa灭菌20rnin。

50×TAE缓冲液：称取Tris 242．2g，先用300mL水加热搅拌溶解后，加100mL500mmol／L乙二胺四乙酸二钠的水溶液(pH 8.0)，用冰乙酸调pH至8.0，然后用水定容到1000mL。

Taq DNA聚合酶(5U／μL)及10×PCR反应缓冲液(含25mmol／LMg2十)。

溴化乙锭溶液：10mg／mL。溴化乙锭(EB)有致癌作用，使用时要戴一次性手套。

1mol／LTris—HCl(pH 8.0)溶液：称取121.1g Tris碱溶解于800mL水中，用浓盐酸调pH至8.0，用水定容至1000mL，在103.4kPa灭菌20min。

TE缓冲液(pH 8.0)：1mol／L Tris—HCl(pH 8.0)10mL和500mmol／L EDTA(pH 8.0)溶液2mL，用水定容至1000mL，分装后高压灭菌。

加样缓冲液：称取溴酚蓝250mg，加水10mL，在室温下过夜溶解；再称取二甲苯腈蓝250mg，用10mL水溶解；称取蔗糖50g，用30mL水溶解，合并3种溶液，用水定容至100mL，4℃保存。限制性内切酶Xmn I及反应缓冲液。