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PCR产物的酶切鉴定结果分析和表述

发布时间:2014-10-25 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:2276

CaMV35S启动子基因扩增产物为195bp,可以被限制性内切酶Xmn I切成大小为80bp和115bp的两个片段。具体操作为:取15μL回收的PCR产物放入酶切管中,加入1μL的限制性内切酶XmnI,再加入2μL酶切反应缓冲液,加水2μL配成20μL反应体系,在37℃恒温水浴保温反应3h。将20μL反应液与上样缓冲液混合后加入预制好的含2.5%琼脂糖凝胶的一个泳道中,然后进行电泳检测和凝胶成像分析。

结果分析和表述

①如果在试样和GMO阳性对照的PCR反应中,CaMV 35S启动子、NOS终止子、CP4-EPSPS、CaMV35S启动子和叶绿体转移肽基因片段(CaMV 35S—CTP4)以及内标准lectin这5个基因都得到了扩增,且扩增片段与预期片段一致,而在GMO阴性对照中仅扩增出lectin九基因片段,空白对照中没有任何扩增片段,表明该样品为阳性结果,检出了CaMV35S启动子基因、NOS终止子基因、CaMV 35S启动子和叶绿体转移肽基因片段(CaMV35S—CTP4)、抗草甘膦基因。

如果在试样和GMO阳性对照的PCR反应中,CaMV35S启动子和内标准lectin这两个基因都得到了扩增,且扩增片段与预期片段一致,而在GMO阴性对照中仅扩增出lectin基因片段,空白对照中没有任何扩增片段,在对试样的CaMV 35S启动子扩增片段的酶切鉴定中,扩增片段可以被切成80bp和115bp两个片段,表明该样品为阳性结果,检出CaMV 35S启动子基因。

②如果在试样和GMO阴性对照的PCR反应中,仅有lectin基因片段得到扩增;GMO阳性对照中CaMV35S启动子、NOS终止子、CP4一EPSPS、CnMV 35S—CTP4以及lectin以基因都得到扩增;空白对照中没有任何扩增片段。表明该样品为阴性结果,未检出CaMV35S启动子、NOS终止子、CaMV 35S—CTP4、抗草甘膦基因。

如果在试样和GMO阴性对照的PCR反应中,仅有zec£in基因片段得到扩增;GMO阳性对照中CaMV35S启动子和lectin基因都得到扩增;空白对照中没有任何扩增片段。表明该样品为阴性结果,未检出CaMV35S启动子基因。

③如果在试样、GMO阳性对照和GMO阴性对照PCR反应中,lectin基因片段均未得到扩增,说明在DNA模板制备或PCR反应体系中的某个环节存在问题,需查找原因重新检测。

如果在GMO阴性对照PCR反应中,除lectin基因得到扩增外,还有其他外源基因得到扩增;或者空白对照中扩增出了产物片段,则说明检测过程中发生了污染,需查找原因重新检测。

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