5 仪器和设备

5.1 气相色谱-质谱联用仪：配El源。

5.2 分析天平：感量0.00001g。

5.3 天平：感量0.01g。

5.4 冷冻高速离心机

5.5 电热恒温水浴锅

5.6 漩涡混合器

5.7 均质机

5.8 聚四氟乙烯离心管：50mL。

6 试料的制备与保存

6.1 试料的制备

6.1.1 猪、牛和鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织

取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。

—取均质后的供试样品，作为供试试料。

—取均质后的空白样品，作为空白试料。

—取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

6.1.2 牛奶和鸡蛋

取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶和鸡蛋，混合，并使均质。

―取均质后的供试样品，作为供试试料。

—取均质后的空白样品，作为空白试料。

—取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

6.2 试料的保存

组织试料-20℃以下保存。鸡蛋和牛奶试料2～8℃以下保存。

7 测定步骤

7.1 基质匹配标准曲线的制备

分别精密量取100/ug/mL林可霉素、克林霉素和大观霉素标准工作液适量，用甲醇稀释，配制成浓度为50、100、200、400、800、1600和3200ug/L的系列混合标准溶液，各取1.0mL,分别溶解经提取、净化及吹干的空白试料残余物，充分混匀，室温吹干，加N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺500uL和乙腈100uL,涡漩混合1min,密封，于75℃恒温箱衍生反应1h,于室温氮气吹干，加正己烷0.5mL溶解残余物，涡旋混匀，供气相色谱-质谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.2 提取

7.2.1 肌肉和肾脏组织

称取试料(5±0.05)g,于50mL聚四氟乙烯离心管中，加提取液10mL,振荡5min,5000r/min离心10min,取上清液于另一离心管中，残渣中加提取液10mL,重复提取一次，合并两次上清液，加3%三氯乙酸溶液5mL,混匀，8000r/min离心10min,取上清液，用2mol/L氢氧化钾溶液调PH至5.8±0.2,加十二烷基磺酸钠溶液2mL,漩涡混匀，静置15min,备用。

7.2.2 牛奶和鸡蛋组织

称取试料(5±0.05)g,于50mL聚四氟乙烯离心管中，加提取液10mL；振荡5min,5000r/min离心10min,取上清液于另一离心管中，残渣中加提取液10mL,重复提取一次，合并两次上清液，加正己烷5mL,混匀，5000r/min离心15min,取下层液，用2mol/L氢氧化钾溶液调PH至5.8±0.2,加十二烷基磺酸钠溶液2mL,漩涡混匀，静置15min,备用。

7.3 净化

HLB柱依次用甲醇3mL、水3mL和十二烷基磺酸钠缓冲液3mL活化，取备用液过柱，用水淋洗两次，每次3mL,用甲醇4mL洗脱，收集洗脱液，于40℃水浴氮气吹至近干，室温吹干，加N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺500uL和乙腈100uL,涡漩混合1min,密封，于75℃恒温箱衍生反应1h,室温氮气吹干，用正己烷0.5mL溶解残余物，涡漩混匀，供气相色谱-质谱测定。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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