薄层色谱法的优缺点及操作步骤
来源/作者:中国标准物质网  日期:2014-10-27 11:06:06

(1)定义薄层色谱,或称薄层层析,薄层层析是把支持物均匀涂布于支持板(常用玻璃板,也可用涤纶布等)上形成薄层,然后用相应的溶剂进行展开。从而对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。

(2)分类薄层层析可根据作为固定相的的支持物不同,分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。

(3)方法的优缺点

①优点:操作方便、设备简单、显色容易等特点,同时展开速率快,一般仅需15~20min;混合物易分离,分辨力一般比以往的纸层析高10~100倍,它既适用于只有
0.01μg的样品分离,又能分离大于500mg的样品作制备用,而且还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂。

②缺点:对生物高分子的分离效果不甚理想。

(3)操作步骤

①薄层板制备:除另有规定外,将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后,倒入涂布器中,在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为
0.2~O.3mm),取下涂好薄层的玻板,置水平台上于室温下晾干,后在110℃烘30min,即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视)。

②点样:除另有规定外,用点样器点样于薄层板上,一般为圆点,点样基线距底边2.Ocm,样点直径及点间距离同纸色谱法,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。

③展开:展开室如需预先用展开剂饱和,可在室中加入足够量的展开剂,并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条,一端浸入展开剂中,密封室顶的盖,使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5~1.Ocm(切勿将样点浸入展开剂中),密封室盖,待展开至规定距离(一般为10-15cm),取出薄层板,晾干,按各品种项下的规定检测。

④显色:取出的薄层板,立即喷洒显色剂,使其显色,计算Rf值或使之出现各种有色的斑点,与标准进行对照比较,可确定其成分。

【关键词】薄层色谱 优缺点 中国标准物质