5 检验程序

大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。

图1 大肠菌群MPN计数法检验程序

6 操作步骤

6.1 样品的稀释

6.1.1 固体和半固体样品：称取25g样品,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min～10000r/min均质1min～2min,或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min,制成1:10的样品匀液。

6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

6.1.3 样品匀液的PH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L NaOH或1mol/LHCl调节。

6.1.4 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。

6.1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。

6.2 初发酵试验

每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液)，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白B(LST)肉汤，每管接种1mL(如接种量超过1mL,则用双料LST肉汤)，36℃±1℃培养24h±2h,观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2h,产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。

6.3 复发酵试验

用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环,移种于煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管中，36℃±1℃培养48h±2h,观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。

6.4 大肠菌群最可能数(MPN)的报告

按6.3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表,报告每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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