5 操作步骤

5.1 前增菌

称取25g(mL)样品放入盛有225mL BPW的无菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min,或置于盛有225mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如需测定pH,用1mol/mL无菌NaOH或HCl调PH至6.8±0.2。

无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8h～18h。

如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min或2℃～5℃不超过18h解冻。

5.2 增菌

轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL,转种于10mL TTB内，于42℃±1℃培养18h～24h。同时，另取1mL,转种于10mL SC内，于36℃±1℃培养18h～24h。

5.3 分离

分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板(或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板)。于36℃±1℃分别培养18h～24h(XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板)或40h～48h(BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。

表1 沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征

5.4 生化试验

5.4.1 自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36℃±1℃培养18h～24h,必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2。

表2 沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果

5.4.2 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36℃±1℃培养18h～24h,必要时可延长至48h,按表3判定结果。将已挑菌落的平板储存于2℃～5℃或室温至少保留24h,以备必要时复查。

表3沙门氏菌属生化反应初步鉴别表

5.4.2.1 反应序号Al：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常为非沙门氏菌。

表4沙门氏菌属生化反应初步鉴别表

5.4.2.2 反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。

5.4.2.3 反应序号A3：补做ONPG。ONPG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。

5.4.2.4 必要时按表5进行沙门氏菌生化群的鉴别。

表5 沙门氏菌属各生化群的鉴别

5.4.3 如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据5.4.1的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。

相关链接：食品微生物学检验沙门氏菌检验（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。