1范围

本标准规定了食品中粪大肠菌群计数的方法。

本标准适用于各类食品中粪大肠菌群的计数。

2术语和定义

粪大肠菌群

一群在44.5℃培养24h～48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌群来自人和温血动物粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。

3技术要求设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a)恒温培养箱：36℃±1℃;

b)冰箱：2℃～5℃;

c)恒温水浴箱：44.5℃±0.2℃:

d)天平：感量0.1g;

e)均质器；

f)振荡器；

g)无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头；

h)无菌锥形瓶：容量500mL;

i)无菌培养皿：直径90mm;

j)PH计或PH比色管或精密PH试纸。

4培养基及试剂

4.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨(Lauryl Sulfate Tryptose,LST)肉汤。

4.2EC肉汤(E.coliBroth)。

4.3无菌生理盐水。

4.4 1mol/L NaOH。

4.5 1mol/LHCl。

5 检验程序

粪大肠菌群检验程序见图1。

图1粪大肠菌群MPN计数法检验程序

6 操作步骤

6.1 样品的稀释

6.1.1 固体和半固体样品：称取25g样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r∕min均质1min～2min,制成1：10样品匀液，或置225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍打式均质器拍打1min～2min,制成1：10的样品匀液。

6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取样品25mL置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。

6.1.3 样品匀液的PH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调节。

6.1.4 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入盛有9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振揺试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。

6.1.5 根据对样品污染状况的估计，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。

6.2 初发酵试验

每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液)，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤，每管接种1mL(如接种量需要超过1mL,则用双料LST肉汤)，36℃±l℃培养24h±2h,观察倒管内是否有气泡产生，24h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为粪大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。

6.3 复发酵试验

用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于预先升温至44.5℃的EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管放入带盖的44.5℃±0.2℃恒温水浴箱内，培养24h±2h,水浴箱的水面应高于肉汤培养基液面，记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群阳性，不产气为粪大肠菌群阴性。

定期以己知为44.5℃产气阳性的大肠杆茵和44.5℃不产气的产气肠杆菌或其他大肠菌群细菌作阳性和阴性对照。

6.4 粪大肠菌群MPN计数的报告

根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，含粪大肠菌群最可能数(MPN)检索表,报告每g(mL)粪大肠菌群的MPN值。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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