4.3.2.2 动力试验

用接种针挑取培养物穿刺接种于动力培养基中，30℃培养24h。有动力的蜡样芽孢杆菌应沿穿刺线呈扩散生长，而蕈状芽孢杆菌常呈“绒毛状”生长。也可用悬滴法检查。

4.3.2.3 溶血试验

挑取纯培养的单个可疑菌落接种于TSSB琼脂平板上，30℃±1℃培养24h±2h。蜡样芽孢杆菌菌落为浅灰色，不透明，似白色毛玻璃状，有草绿色溶血环或完全溶血环。苏云金芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌呈现弱的溶血现象，而多数炭疽芽孢杆菌为不溶血，巨大芽孢杆菌为不溶血。

4.3.2.4 根状生长试验

挑取单个可疑菌落按间隔2cm～3cm距离划平行直线于经室温干燥1d～2d的营养琼脂平板上，30℃±1℃培养24h～48h,不能超过72h。用蜡样芽孢杆菌和草状芽孢杆菌标准株作为对照进行同步试验。蕈状芽孢杆菌呈根状生长的特征。蜡样芽孢杆菌菌株呈粗糙山谷状生长的特征。

4.3.2.5 溶菌酶耐性试验

用接种环取纯菌悬液一环，接种于溶菌酶肉汤中，36℃±1℃培养24h。蜡样芽孢杆菌在本培养基(含0.001%溶菌酶)中能生长。如出现阴性反应，应继续培养24h。巨大芽胞杆菌不生长。

4.3.2.6 蛋白质毒素结晶试验

挑取纯培养的单个可疑菌落接种于硫酸锰营养琼脂平板上，30℃±1℃培养24h±2h,并于室温放置3d～4d,挑取培养物少许于载玻片上，滴加蒸镏水混匀并涂成薄膜。经自然干燥，微火固定后，加甲醇作用30s后倾去，再通过火焰干燥，于载玻片上滴满0.5%碱性复红，放火焰上加热(微见蒸气，勿使染液沸腾)持续1min～2min,移去火焰，再更换染色液再次加温染色30s,倾去染液用洁净自来水彻底清洗、晾干后镜检。观察有无游离芽胞(浅红色)和染成深红色的菱形蛋白结晶体。如发现游离芽胞形成的不丰富，应再将培养物置室温2d～3d后进行检查。除苏云金芽孢杆菌外，其他芽孢杆菌不产生蛋白结晶体。

4.3.3 生化分型(选做项目)

根据对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P试验反应、明胶液化试验，将蜡样芽孢杆菌分成不同生化型别，见表2。

表2蜡样芽孢杆菌生化分型试验

4.4 结果计算

4.4.1 典型菌落计数和确认

4.4.1.1 选择有典型蜡样芽孢杆菌菌落的平板,且同一稀释度3个平板所有菌落数合计在20CFU～200CFU之间的平板，计数典型菌落数。如果出现a)～f)现象按4.421中公式(1)计算，如果出现g)现象则按4.4.2.2中公式(2)计算；

a)只有一个稀释度的平板菌落数在20CFU～200CFU之间且有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落；

b)2个连续稀释度的平板菌落数均在20CFU～200CFU之间，但只有一个稀释度的平板有典型菌落，应计数该稀释度平板上的典型菌落；

c)所有稀释度的平板菌落数均小于20CFU且有典型菌落，应计数最低稀释度平板上的典型菌落；

d)某一稀释度的平板菌落数大于200CFU且有典型菌落，但下一稀释度平板上没有典型菌落，应计数该稀释度平板上的典型菌落；

e)所有稀释度的平板菌落数均大于200CFU且有典型菌落，应计数最高稀释度平板上的典型菌落;

f)所有稀释度的平板菌落数均不在20CFU～200CFU之间且有典型菌落，其中一部分小于20CFU或大于200CFU时，应计数最接近20CFU或200CFU的稀释度平板上的典型菌落。

g)2个连续稀释度的平板菌落数均在20CFU～200CFU之间且均有典型菌落。

4.4.1.2 从毎个平板中至少挑取5个典型菌落(小于5个全选)，划线接种于营养琼脂平板做纯培养，30℃±1℃培养24h±2h°

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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