5 菌株及其鉴定与保存

5.1 试验菌株

推荐采用下列的菌株组合:

a)鼠伤寒沙门氏菌TA1535；

b)鼠伤寒沙门氏菌TA97a或TA97或TA1537；

c)鼠伤寒沙门氏菌TA98；

d)鼠伤寒沙门氏菌TA100;

e)鼠伤寒沙门氏菌TA102或大肠杆菌WP2uvrA或大肠杆菌WP2uvrA(PKM101)。

5.2 菌株的鉴定

5.2.1 总则

菌株特性应与回复突变试验标准相符。菌株的鉴定包括：基因型鉴定、自发回变数鉴定和对阳性致突变物敏感性的鉴定。

每3个月进行一次菌株鉴定，遇到下列情况也应进行菌株鉴定：

a)在收到培养菌株后；

b)当制备一套新的冷冻保存或冰冻干燥菌株时；

c)重新挑选菌株时；

d)使用主平板传代时。

5.2.2 鉴定方法

5.2.2.1 增菌培养

在5mL营养肉汤培养基中用接种环接种贮存菌培养物，37℃振荡(100次/min)培养10h或静置培养16h,使活菌数不少于1×10⁹/mL～2×10⁹/mL。

5.2.2.2 组氨酸缺陷型(his)的鉴定

5.2.2.2.1 底层培养皿的制备

加热融化底层培养基两瓶。一瓶不加组氨酸，每100mL底层培养基中加0.5mmol D-生物素0.6mL；另一瓶加组氨酸，每100mL底层培养基中加L-组氨酸1mL和0.5mmol D-生物素0.6mL。冷却至50℃左右，每种底层培养基各倒两个平板。

5.2.2.2.2 接种

取有组氨酸和无组氨酸培养基平板各一个，按菌株号顺序各取一接种环的菌液划直线于培养基表面，37℃培养48h。

5.2.2.2.3 结果判定

株菌在有组氨酸培养基平板表面各长出一条菌膜，在无组氨酸培养基平板上除自发回变菌落外无菌膜，说明受试菌株确为组氨酸缺陷型。

5.2.2.3 脂多糖屏障缺陷(rfa)的鉴定

5.2.2.3.1 接种

加热融化营养肉汤琼脂培养基。取菌液0.1mL移入平板，迅速将营养肉汤琼脂培养基(冷却至50℃左右)适量倒入平板,混匀，平放凝固。将无菌滤纸片一片放入已凝固的培养基平板中央，用移液器在滤纸片上滴加0.1%结晶紫溶液10μL,37℃培养24h,每个菌株做一个平板。

5.2.2.3.2 结果判定

阳性者在纸片周围出现一个透明的抑制带,说明存在rfa突变。这种变化允许某些大分子物质进入细菌体内并抑制其生长。

5.2.2.4 R因子(抗氨苄青霉素)的鉴定

5.2.2.4.1 接种

加热融化营养肉汤琼脂培养基,冷却到50℃左右,适量倒入平板中，平放凝固，用移液器吸0.8%的氨苄青霉素10uL,在凝固的培养基表面沿中线涂成一条带，待氨苄青霉素溶液干后，用接种环取各菌株菌液与氨苄青霉素带相交叉划线接种，并且接种一个不具有R因子的菌株作氨苄青霉素抗性的对照，37℃培养24h,一个平板可同时鉴定几个菌株。

5.2.2.4.2 结果判定

菌株在氨苄青霉素带的周围依然生长不受抑制，即有抗氨苄青霉素效应,证明它们都带有R因子。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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