6.3 对照组的设置

试验应同时设阳性对照组、溶媒对照组和未处理对照组,包括加和不加S9种情况。

阳性对照物要根据所采用的菌株进行选择,并选择合适的剂量以保证每次试验的有效性。

溶媒对照组的处理方法除不加入受试物外与处理组相同。

当阳性致突变物采用DMSO溶解，而受试物不用DMSO溶解时,应同时做QMSO溶媒对照。

6.4含组氨酸受试物

对已知和经证实含有组氨酸并可能影响试验结果的受试物必要时进行预处理(如经XAD-Ⅱ树脂柱过滤)。

7 试验方法

7.1 总则

常用的试验方法有平板掺入法、预培养平板掺入法和点试法等。

7.2 平板掺入法

7.2.1 将主平板或冷冻保存的菌株培养物接种于营养肉汤培养基内，37℃振荡(100次/min)培养10h或静置培养16h,使活菌数不少于1×10⁹/mL。

7.2.2 底层培养基平板,每个剂量加S9和不加S9均做3个平板。

7.2.3 融化顶层培养基分装于无菌带帽小试管(试管数与平板数相同)，每管2mL,在45℃水浴中保温。

7.2.4 在保温的顶层培养基(试管)中依次加入测试菌株新鲜增菌液0.1mL,混匀；试验组加受试物0.05mL～0.2mL(一般加入0.1mL,需活化时另加10% S9混合液0.5mL),再混匀，迅速倾入铺好底层培养基的平板上，转动平板使顶层培养基均匀分布在底层培养基上，平放固化；37℃培养48h观察结果，必要时延长至72h观察结果。

7.2.5 阳性对照组加入同体积标准诱变剂；溶媒对照组只加入同体积的溶媒;未处理对照组只在培养基上加菌液;其他方法同试验组。

7.3 预培养平板掺入法

预培养对于某些受试物可取得较好效果。因此可根据情况确定是否进行预培养。在加入顶层培养基前,先进行以下预培养步骤：

a)将受试物(需活化时另加10% S9混合液0.5mL)和菌液,在37℃中培养20min,或在30℃中培养30min；

b)再加入2mL顶层琼脂；

其他同7.2。

7.4 点试法

7.4.1 按7.2.1操作。

7.4.2 按7.2.2操作。

7.4.3 按7.2.3操作。

7.4.4 在水浴保温的顶层培养基中依次加入测试增菌液0.1mL(需活化时另加10% S9混合液0.5mL),混匀,迅速倾入底层培养基上,转动平板,使顶层培养基在底层分布均匀。平放固化后取无菌滤纸片(直径约为6mm),小心放在已固化的顶层培养基的适当位置上，用移液器取适量受试物(如10uL),点在纸片上，或将少量固体受试物结晶加到纸片或琼脂表面;37℃培养48h观察结果。

7.4.5 另作阳性对照组和溶媒对照组,分别在滤纸片上加入同体积标准诱变剂、溶媒,未处理对照组滤纸片上不加物质,其他步骤同上。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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