A.1 安全提示

本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，操作时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。

A.2 一般规定

本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682—2008中规定的三级水；试验中所用标准滴定溶液和其他所需溶液，在未注明时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603之规定配制。

A.3 鉴别试验

A.3.1 试剂和材料

氢氧化钠溶液：c(NaOH)=0.1mol/L。

A.3.2 仪器和设备

紫外分光光度计，附1cm吸收池。

A.3.3 紫外吸收试验

称取实验室样品，加氢氧化钠溶液制成每1mL中含10ug实验室样品的溶液，用紫外分光光度计测定，在(256±2)nm,(283±2)nm,(365±4)nm的波长处有最大吸收，在256nm与365nm波长处的吸光度比值应为2.8～3.0。

A.4 叶酸的测定

A.4.1 试剂和材料

A.4.1.1 甲醇：色谱级。

A.4.1.2 磷酸二氢钾。

A.4.1.3 氢氧化钾溶液：c(KOH)=0.1mol/L。

A.4.1.4 氨水溶液：0.5→100。

A.4.1.5 叶酸对照品。

A.4.2 仪器和设备

高效液相色谱仪。

A.4.3 色谱分析条件

推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表A.1,叶酸典型高效液相色谱图参见附录B,其他能达到同等分离程度和柱效的色谱柱和色谱条件均可使用。

表A.1 色谱柱和典型色谱操作条件

A.4.4 分析步骤

A.4.4.1 对照品溶液的制备：

称取约10mg叶酸对照品，精确至0.02mg,置50mL容量瓶中，加30mL氨水溶液溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。

A.4.4.2 实验室样品溶液的制备：

称取约10mg实验室样品，精确至0.02mg,置50mL容量瓶中，加30mL氨水溶液溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。

A.4.4.3 系统适用性试验

理论塔板数按叶酸峰计算应不低于2000,叶酸峰与相邻杂质峰的分离度应大于1.5。

A.4.4.4 测定

按表A.1色谱柱和典型色谱操作条件,精密量取10uL实验室样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；另取叶酸对照品溶液，同法测定。

A.4.5 结果计算

叶酸含量(以C₁₉H₁₉N₇O₆计,干基计)的质量分数以W1计，数值以％表示，按式(A.1)计算：

式中：

m—实验室样品的进样量的数值，单位为毫克(mg)；

m1—叶酸对照品的进样量的数值，单位为毫克(mg)；

W2—叶酸对照品(以C₁₉H₁₉N₇O₆计,湿基计)的质量分数的数值，数值以%表示；

W3—按A.5下测定实验品样品含水量的质量分数的数值，数值以%表示；

A1—实验室样品溶液中叶酸的峰面积的数值；

A2—对照品溶液中叶酸的峰面积的数值。

取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果,两次平行测定结果的相对偏差不大于2.0%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(一)》

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