A.4.4 分析步骤

A.4.4.1 离子交换柱的准备：将离子交换柱固定在架子上，关上活塞，在柱底填1cm厚的玻璃棉，倒入约10mL水，注入树脂至树脂床高30cm,用盐酸溶液浸没备用。树脂使用前按树脂再生步骤中的处理过程处理后即可进样。

A.4.4.2 树脂的再生：每次样品洗脱分离完毕，用200mL盐酸溶液流过树脂床，待剩余的盐酸溶液高于树脂层约3cm时停止流出且浸泡过夜。再使用50mL盐酸溶液流过柱子最后至注满，关闭交换柱活塞，塞上橡皮塞，倒转几次使树脂松动，排出气泡将柱子垂直固定在架上，先用水慢速冲洗树脂，然后以5.5～6.0mL/min的流速洗至流出液的PH为4.5～5.0(用水约80mL)。维持液面高于树脂层1cm,关闭交换柱和分液漏斗的活塞备用。

离子交换柱树脂床中不能有气泡；每次分离完毕，树脂必须再生；在再生树脂和分离样品的全过程中始终保持柱中液面高出树脂层。

A.4.4.3 当树脂批号或交换柱参数改变时，需按A.4.4.5选择最佳分离条件的程序，用已知组成的样品，选用合适的洗提溶液，核对离子交换柱色谱分离的准确性。

A.4.4.4 工作曲线的制作：准确吸取五氧化二磷标准溶液(A.4.2.8)0.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL、15.00mL、20.00mL、25.00mL,分别移入硬质玻璃试管中，加水稀释至25mL,加入10mL钼酸铵-硫酸溶液，2mL抗坏血酸溶液，在沸水浴中至少加热30min,保证水解完全。冷却至室温，分别移入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。用分光光度计在650nm处，以2cm比色皿，用水作参比测定工作曲线系列溶液的吸光度。以各工作曲线系列溶液的吸光度扣除空白溶液的吸光度为横坐标，以五氧化二磷质量(mg)为纵坐标绘制工作曲线。

A.4.4.5 选择最佳色谱分离条件：在选定离子交换柱以后，装入处理好的树脂，然后按A4.4.6称取试样，制备试样溶液，进样，加入洗脱溶液,每5mL流出液收作一份，分别移入硬质玻璃试管中，加水稀释至25mL,加入10mL钼酸铵-硫酸溶液，2mL抗坏血酸溶液，在沸水浴中至少加热30min,保证水解完全。冷却至室温分别移入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。用分光光度计在650mn处，以2cm比色皿，用水作参比，分别测定吸光度，从工作曲线上查得对应的五氧化二磷质量(mg),绘制流出曲线，从而确定量佳分离条件。本标准选用内径10min柱，树脂床高300mm,柱流速5.5～6.0mL/min,用0.15mol/L氯化钾溶液70mL,0.25mol/L氯化钾溶液90mL、0.50mol/L氯化钾溶液90mL，75mol/L氯化钾溶液70mL依次洗脱正、焦、三偏磷酸盐。如图A.2所示。

A.4.4.6 试样溶液的配制：称取约1g试样，精确到0.0002g,加水溶解，移入500mL容量瓶中，加入10mL缓冲溶液，用水稀释至刻度，混匀(若混浊需过滤)。

A.4.4.7 色谱柱分离：准确吸取10mL试样溶液于交换柱上端的分液漏斗中，打开分液漏斗和交换柱的活塞，使试液流入树脂床，用10mL 0.15mol/L氯化钾溶液冲洗分液漏斗，用60mL 0.15mol/L氯化钾溶液冲洗树脂床，控制流速5.5～6.0mL/min,洗提液可弃去；再用90mL 0.25mol/L氯化钾溶液冲洗树脂床，控制流速5.5～6.0mL/min,洗提液可弃去。用90mL 0.50mol/L氯化钾溶液洗提分离三聚磷酸盐组分，将三聚磷酸钠洗出液收集于400mL高型烧杯中。

A.4.4.8 测定洗出液中五氧化二磷含量:在三聚磷酸钠洗出液中加入15mL硝酸溶液,70mL水,微沸40min,用水冲洗表面皿和烧杯壁，控制试验溶液体积约为100mL。再加热至近沸腾，趁热加入50mL喹钼柠酮溶液,盖上表面皿，加热沸1min，保温30s(在加入试剂和加热过程中，不得使用明火，不得搅拌，以免凝结成块)。冷却至室温。用已于180℃±5℃下干燥45min的玻璃砂坩埚以倾析法过滤，在烧杯中洗涤沉淀三次，每次用水15mL,将沉淀移入玻璃砂坩埚中，继续用水洗涤(所用洗涤水共约150mL)。于180℃±5℃下干燥45min,或于250℃±5℃下干燥15min,在干燥器中冷却至室温，称量。同时进行空白试验。

空白试验除不加试样外，其他操作及加入试剂的种类和量与测定试样相同。

A.4.5 结果计算

三聚磷酸钠含量以三聚磷酸钠(Na₅P₃O₁₀)的质量分数W1计，数值以％表示，按公式(A.1)计算：

式中：

m1—试样溶液的磷钼酸喹啉沉淀质量的数值，单位为克(g);

m0—空白试验的磷钼酸喹啉沉淀质量的数值，单位为克(g);

m—试料质量的数值，单位为克(g);

0.05541—磷钼酸喹啉换算成三聚磷酸钠的系数。

取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.5%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(一)》

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