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高效液相色谱法/红外光谱法

发布时间:2014-11-04 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:599

高效液相色谱与傅里叶变换红外光谱(HPIJC一盯IR)联用的主要困难是色谱流动相在红外区往往有强吸收,这就严重地影响色谱馏分的红外检测。迄今为止,能提供的商品接口尚停留在流动池上,其它形式的接口,虽有多种设想,但仍处于实验室阶段。

流动池接口的工作原理。流动池置于样品室内,它是一个具有进口及出口的可拆式或固定式微型液体池。HPLC流出液直接从下端进样管流人,然后从上端的出口管流出,并进行红外同步跟踪扫描和检测HPLC馏分。流动池的光程长度对联机检测很重要,它由色谱流动相对红外光的吸收情况所决定。为了保持足够高的红外透明度,以便在中红外区较宽的波长区域能观察溶质的吸收带,流动池的光程一般以O.1mn为宜,池体直径通常不超过4ram,因此流动池的有效容积小于2.5pl。

常规HPLC柱(内径4 6mm)色谱峰的保留体积约为250p,l,故用流动池作接口时,分离卅的馏分实际有效用量仅为1%左右,因此HPI。C一盯IR在溶剂红外透明度较高的光谱区里,在反相液相色谱中,流动相含水,流动池的光程应更短,一般说来,它已不适合作为反相液相色谱的接口。

使流动池的体积与色谱峰体积相匹配的一个办法是采用高效微柱,不但流动相用量少,而且在进样量相同的情况下,色谱峰浓度要比常规柱高得多。流动相用量少(整个色谱分离过程仅需lml左右),意味着可采用价昂但能提供合适红外窗口的氘代试剂作流动相;峰浓度增加则表明可降低检测限。但对于红外吸收强烈的流动相,即使采用微柱,其检测限仍然较高。对于梯度洗脱,由于流动相组成在变化,这就使应用示差光谱程序以减免溶剂影响成为不太可能。

因此,在HPLC联用技术研究中,许多工作又集中在测定红外光谱前,将溶剂除去以排除溶剂干涉的接口七。如热雾化技术、冷雾化技术、“过渡存贮”(buffer memory)技术等。这些探索在某些分析实例中取得了成功,并认为去除HPLC溶剂的方法比较好,但各种形式的接口尚不够完善,距实用化还有距离。

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