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由于液相色谱过程中影响溶质迁移的因素较多,同一组分在不同色谱条件下的保留值相差很大,即便在相同的操作条件下,同一组分在不同色谱柱上的保留也可能有很大差别,因此液相色谱与气相色谱相比,定性的难度更大。常用的定性方法有以下几种:
(1)利用已知标准样品定性
利用标准样品对未知物定性是最常用的液相色谱定性方法,该方法的原理与气相色谱法相同。由于每一种化合物在特定的色谱条件下(流动相组成、色谱柱、柱温等),其保留值具有特征性,因此可利用保留值进行定性。如果在相同的色谱条件下被测化合物与标样的保留值一致,可初步认为被测化合物与标样相同。
若流动相组成经多次改变后,被测化合物的保留值仍与标样的保留值一致,可进一步证实被测化合物与标样为同一化合物。
(2)利用检测器的选择性定性
同一种检测器对不同种类的化合物的响应值是不同的,而不同的检测器对同一种化合物的响应也是不同的。所以当某一被测化合物同时被两种或两种以上检测器检测时,两检测器或几个检测器对被测化合物检测灵敏度比值是与被测化合物的性质密切相关的,可以用来对被测化合物进行定性分析,这就是双检测器定性体系的基本原理。
双检测器体系的联接一般有串联联接和并联联接两种方式。当两种检测器中的一种是非破坏型的,则可采用简单的串联联接方式,方法是将非破坏型检测器串接在破坏型检测器之前。若两种检测器都是破坏型的,则需采用并联方式联接,方法是在色谱柱的出1:3端连接一个三通,分别联接到两个检测器上。
在液相色谱中最常用于定性鉴定工作的双检测体系是紫外检测器和荧光检测器。
(3)利用紫外检测器全波长扫描功能定性
紫外检测器是液相色谱中使用最广泛的一种检测器。全波长扫描紫外检测器可以根据被检测化合物的紫外光谱图提供一些有价值的定性信息。
近年来,随着二极管阵列检测器的普及,传统的紫外全波长扫描方法已使用不多。利用二极管阵列检测器可得到更多的信息,包括色谱信号、时间、波长的三维色谱光谱图,其定性结果与传统方法相比具有更大的优势。
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