随着天然药物化学技术的发展，药品标准的检测方法不断的提高和完善，涉及标准物质的品种和数量大幅度增加(包括杂质对照品)。以标准物质作为对照品而建立的各种色谱技术，在中药和天然药物有效成分的分析中得到了广泛的应用。但是，少数因制备困难、价格昂贵，性能不稳定或难以获得的对照品常常出现短缺，严重的影响了国家药品标准物质的研究、制备、标化，以及中药及天然药物质量控制工作的进行。近年来，已有很多文献报道，采用对照品替代法(亦称替代对照品法)对中药有效成分进行含量测定的研究，并对其进行了方法学研究。对照品替代法已被2010年版《中国药典》所收载。该法的应用，有效地解决了的上述难题，大大提高了药品的安全性和有效性。

一、对照品替代法的基本原理

1. 基本原理对照品替代法系使用一种易得的、便宜的对照品来代替所需的中药对照品，对中药的单一组分或多组分(即“一测多评”)有效成分进行含量测定的方法，其将测得的“相对校正因子”载入到各品种项下，用替代对照品结合校正因子的方法进行药品质量控制。校正因子：

式中，Ai为替代对照品的峰面积；Ar为对照品的峰面积；Ci为替代对照品的浓度；Cr为对照品的浓度。

在一定的色谱条件下，配制一定浓度的对照品和替代对照品的溶液，以进样量为横坐标，以峰面积A为纵坐标，分别测定对照品和替代对照品的标准曲线，将标准曲线的截距校正为0后，用两条标准曲线斜率K的比值求得校正因子(f)。

测定样品时，用对照品进行测定，被测样品浓度：

同时用替代对照品进行测定，被测样品浓度：

式中.At为被测样品峰面积。根据测定结果，观察替代对照品进行药品质量控制的可行性。

2. 一测多评法在多指标质量评价时，以药材中某一典型组分(有对照品供应者)为内标，建立该组分与其他组分之间的相对校正因子，通过校正因子计算其他组分的含量。这种测定一个成分，实现对多个成分定量的方法命名为“一测多评法”。一测多评法与对照品替代法原理基本一致。

假设某样品中含有i(i=1，2，3，…，k，m)个组分：

式中，Ai为组份峰面积；Wi为组份浓度。

选取其中一组分k为内标，建立组分k与其他组分m之间的相对校正因子。

由此可导出定量计算公式：

式中，Ak为内标物峰面积；Wk为内标物浓度；Am为其他组分m峰面积；Wm为其他组分m浓度。

二、对照品替代法在中药材及饮片质量控制中的研究应用

2015年版《中国药典》一部中，已经收载了采用“对照品替代法”法测定黄连中小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的含量等4个成分的含量。

【含量测定】味连照2015年版《中国药典》四部高效液相色谱法(通则0512)测定。色谱质谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾酸溶液(50∶50)(每1ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH为4.0)为流动相；检测波长为345nm。理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000。分别制备盐酸小檗碱对照品溶液和供试品溶液，精密吸取各10ul注入液相色谱仪。以盐酸小檗碱对照品的峰面积为对照，分别计算小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的含量，用待测成分色谱峰与盐酸小檗碱峰的相对保留时间确定。结果表明，以盐酸小檗碱为替代对照品，同时测定小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的含量，从而控制黄连药材和饮片的质量，方法可行、结果准确。

近年来，在中药和天然药物有效成分的含量测定中，有关“对照品替代法”的研究报道逐渐增多。《欧洲药典》50收载的Grc如alipwe，将大蒜辣素列为大蒜粉质量控制指标，并采用羟苯丁酯作为大蒜辣素的替代对照品，从而解决了大蒜素不稳定的难题。有文献报道用替代对照品法测定丹参和复方丹参片的含量，利用校正因子和替代对照品对羟基苯甲酸甲酯进行了丹参和复方丹参片中丹酚酸B的含量测定；苏丹I替代番茄红素和β-胡萝卜素标准品的研究一文，用苏丹Ⅰ替代番茄红素和β2胡萝卜素标准品，从而建立了一种高效、准确且廉价的番茄红素和β2胡萝卜素的新型测定方法。

对照品替代法在中药、天然药物成分分析和质量评价中，将发挥着越来越重要的作用。

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文章来源：《实用中药药品检验检测技术指南》

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