北京普天同创生物科技有限公司
点样后的薄层需在密闭的加有展开剂的展开室中进行展开,展开时展开剂渗过薄层板的固定相,多数情况下借毛细管作用力的影响,偶尔也借助于压力或离心力的作用,样品与展开剂及固定相之间相互作用的结果使样品中各成分沿展开剂流动的方向被分开。下面对展开方式、展开室、展开过程中的影响因素进行讨论。
1.单向展开
(1)单次展开
单次展开在平面色谱中应用最为广泛,又可有以下模式,在不同需要时应用。(a)为垂直上行展开,适用于各种薄层色谱法;(b)为垂直下行展开,适用于纸色谱法;(c)为一向水平展开,适用于高效薄层色谱法;(d)为对向水平展开,也适用于H盯IJc,样品点在薄层两边,展距约5cm;(e)为圆心水平展开,展距短、展速快,适用于曩值较小组分的分离;(f)为反圆心水平展开,样品点在薄层的周围,展开剂自四周向圆心展开,展速快,可提高墨值较大组分的检测灵敏度和定量准确性。
(2)多次展开
①单向多次展开用相同展开剂沿同一方向进行相同距离的重复展开,直至分离满意。单向多次展开也可以用两种或两种以上极性不同的展开剂分别几次展开,可将极性相差很大的多组分样品在一块薄层板上分离,因此称为阶式展开。
②增量多次展开用同一种展开剂,沿同一方向,展距递增的重复展开。这种展开方式有利于斑点的浓集及R值较小组分的分离,增量多次展开也可以采用不同展开剂进行。
③减量多次展开为了特殊需要,可用同一种展开剂或两种以上不同极性的展开剂沿同一方向,展距递减地重复展开,以达到理想的分离。
2.二维展开一双向展开
此种展开方式常用于成分较多、性质比较接近的难分离组分的分离。二维展开有以下几种形式,一般都用于定性鉴别。
(1)一种展开剂的二维展开
用同一种展开剂进行二维展开,展开后如果被分离的组分斑点在薄层对角线的位置,说明样品组分与薄层两边的对照品相同,有利于组分的鉴别。
(2)两种展开剂的二维展开
第一次展开与第二次展开分别用两种不同的展开荆。这种方法常用于成分较多,性质比较接近的难分离物质的分离,如氨基酸的纸色谱常用此法,实际上是为了增加展距、调节展开剂极性,从而提高分离能力的展开方式。
(3)分离一反应一分离展开
将样品点在正方形薄层板的一角,展开一次后将薄层板用加热、光照或用酸、碱蒸气等方法处理后,将薄层板转90。垂直于第一次展开的方向用相同展开剂再展开第二次,显色后,凡不在对角线上的成分是经处理后新产生的成分,因此,此法也可称为反应薄层法。
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