展开时环境温度对于纸色谱比薄层色谱的影响大，一是因为纸色谱展开时间较长，二是纸色谱属于分配色谱，组分的分配系数受温度影响比较明显。除有特殊规定外，薄层色谱的展开一般在常温下进行。

1．展距的影响

展开方式对分离的影响是不言而喻的，但展距的影响也是不容忽视的。纸色谱的展距一般为20～30cm，常规薄层色谱展距为10～20cm，高效薄层色谱展距为510cm。在这种展距内得不到分离的组分，增加展距并不能改善分离。

因为分离度仅正比于展距的平方根，而增加展距会使斑点扩散反而降低分离度。

因此在一般展距内分离不佳时，不能一味增加展距，而应改变展开方式或优化展开剂，以达到理想结果。

2．展开室的放置

展开室应放置在水平、稳定的实验台上，避免阳光直射，离开热源，对光敏感的物质应避光，在暗室中进行展开。