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定性与定量方法

发布时间:2014-11-08 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:478

一、定性

样品在纸或薄层上分离并定位以后,被检测物质的定性有以下方法。

1.斑点的碡值

在一定条件下,化合物的碡值应该是个常数,但由于平面色谱是开放型不连续的离线操作,色谱条件的微小变动对R,值的影响较大,因此进行定性时必须随行对照品,同时需要经过两种以上不同组成的展开剂,所得到的R,值与对照品一致时,才可确认该被测物与对照品是同一化合物。

2.斑点的显色特性

在日光、紫外光下或用专属性显色剂反应后,被测化合物斑点所显示的颜色或荧光与对照品比较可以定性。分离完美、色彩斑斓、可比性极强的平面色谱图是重要的原始资料,也是平面色谱比其他色谱法提供的更直观的定性依据,保存平面色谱图的最佳方法是彩色摄影。

MAG公司生产的薄层色谱数码相机系统(digital caill(m system reprostai 3)作为平面色谱、电泳图谱等的成像系统,可为最大至20cm×20cm的图谱成像,光源有254nm紫外短波长直射光,302nm紫外中波长透射光,366nm紫外长波长直射光以及z100~750nm可见直射光、透射光或者同时使用。紫外灯室装有滤光片,可清除杂光干扰。采用20~30 kHz高频光源,既可保证光源的最佳效能,同时消除对ccD数字相机的同步效应。且采用最新数码相机技术配合自设软件,控制一切硬件操作及图像分析处理。
由于采用了高分辨、高敏感度的视频数字相机和数据处理系统,色谱成像技术不仅可快速、方便地获得处理、存储图像或数据,并可随时调出存档文件,是定性的最好佐证。利用图像扫描软件,可对图像进行扫描和积分;扫描图与色谱图可同时在荧屏上显示;可利用多种校正方法计算出结果,并打印出报告;并可叠加扫描图进行图像分析。

二.自显影法

1.生物自显影

生物自显影包括生物与酶检出法。具有生物活性的物质,如抗生素等,在纸或薄层上分离后与有相当微生物的琼脂培养基表面接触,经在一定温度下培养后,有抗菌活性物质斑点处的微生物生长受到抑制,琼脂表面出现抑菌点而得到定位。此法是生化定位的一种简便、灵敏的检测方法,可用于如中药的鉴别、药材中有毒物质的检测,抗菌药物的效价测定等。

2.放射自显影

在纸或薄层上分离的放射性同位素的辐射线,可以使照相底片感光,在相同感光条件下,胶片所呈暗度与斑点的放射活性成正比,因此得到的放射显迹图可以进行定性及定量。此外也有用放射线计数器记录纸或薄层上放射性同位素的活度的方法。

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