北京普天同创生物科技有限公司
由于SPE吸嘴操作简单,便于自动化,所以在蛋白质组学的结构分析中的应用日益广泛。吸附剂的种类也不断增多。根据Majors等的归纳,主要有以下种类:
(1)反相色谱SPE吸嘴
最常见的反相色谱吸嘴是C18键合硅胶。此外,还有C8、C4、C2及苯基吸附剂等。这类SPE吸嘴主要用于水溶液中蛋白质的吸附。而样品中大量的盐则可以通过去离子水洗除。最后可以用有机溶剂/水混合液将蛋白质从SPE吸嘴上洗脱。与传统的键合硅胶固相萃取柱一样,这种反相色谱SPE吸嘴的使用范围应该是在pH 2~8之间。如果样品pH值超出此范围的,可以使用以高聚物为吸附剂的反相色谱SPE吸嘴。有一些亲水性较强的多肽,如多磷酸肽、糖肽及硫肽等,在反相色谱填料上的吸附不好,可以使用石墨炭化碳SPE吸嘴。石墨化碳既可以吸附亲水性蛋白质,又可吸附疏水性蛋白质。另外,还可以使用C18与石墨化碳混合型SPE吸嘴。
(2)亲抽胜色谱SPE吸嘴
亲水性色谱SPE吸嘴的吸附剂主要有硅胶及双醇基键合硅胶。在亲水性色谱过程中,一般使用50%~90%(体积比)有机溶剂水溶液溶解样品。由于盐类在这种条件下不会被保留,所以可以将盐类与蛋白质或多肽分离。最后可以用10 mmol/L挥发性酸将蛋白质及多肽洗脱。
(3)离子交换SPE吸嘴
常见的有强阳离子(SCX)SPE吸嘴。由于蛋白质及多肽都具有酸、碱官能团而带电荷,可以应用离子交换原理进行分离纯化。
(4)金属螯合萃取吸嘴
金属螯合SPE吸嘴有多种。如以Fe(Ⅲ)、Ga(Ⅲ)为金属的螯合物可用于磷酸肽的分离。此外,还有TiO2、ZrO2及Ni(Ⅱ)等。
(5)透析及色谱结合SPE吸嘴
这种SPE吸嘴是将色谱吸附剂装填在毛细管状透析管中,然后将此透析管固定在吸嘴的尖部。应用这种特殊的萃取吸嘴可以通过两种机理对微升级的样品进行分离纯化。透析管可以截住分子质量大于10000 Da的分子,分子质量较小的DNA、蛋白质可以扩散通过透析膜进入微透析管内并被管内的色谱吸附剂保留。未被吸附的组分可以通过洗涤除去。更换适当的溶剂可以将被吸附剂吸附的组分洗脱并扩散至微透析管外,从而达到分离纯化的目的。这种萃取吸嘴一方面可以除去大分子,另一方面可以除去未被填料吸附的小分子。
除了上述几种常见的SPE吸嘴外,人们开发研究了亲和色谱萃取SPE吸嘴、酶分离SPE吸嘴等。
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