北京普天同创生物科技有限公司
虽然生产厂家要求SPE柱只能一次性使用,但是,为了降低成本,许多实验室都希望能够对使用过的SPE柱进行处理后多次使用。虽然这个出发点很好,但对SPE柱的重复使用必须慎重。
如果希望重复使用SPE柱,必须对SPE柱进行再生处理。在进行再生处理前,应该对再生的成本进行评估。因为再生处理需要消耗溶剂,花费时间和人力,所以必须评估对SPE柱再生是否值得。如果再生需要消耗很多溶剂和时间,成本比购买新SPE柱还要高,就没有必要进行这种再生处理。另外,SPE柱能否再生后重复使用,在很大程度上取决于样品基质的复杂程度。样品基质越复杂,在SPE柱上残留的越多,SPE柱重复使用的可能性就越小。如果样品基质中含有大量的蛋白质、脂类、腐殖质类的成分,而且部分样品基质成分在完成萃取后依然稳固地保留在SPE柱上,对SPE柱的再生就较为困难。对于硅胶基质的反相SPE柱,还要考虑萃取过程中使用的pH条件,如果在萃取中的使用的溶液酸碱度超出了硅胶基质的安全范围,势必造成部分硅胶水解,影响其萃取性能。硅胶水解程度越大,SPE柱再生重新使用的机会就越小。
对再生处理的SPE柱必须进行评估。首先是对本底进行评估:用空白样品对再生SPE柱按照正常的SPE程序进行操作,收集洗脱馏分,并对其进行检测。如果洗脱馏分中出现可能干扰对目标化合物进行分析的杂质峰,就表明再生程序不合适,需要修改。例如,增加再生溶剂体积或更改再生溶剂性质。如果再生SPE柱通过了本底评估,就要进行目标物残留的评估,以确保经过再生的SPE柱没有目标化合物残留,或其残留量对目标化合物的分析没有影响。否则,要么就是修改再生方法,要么就是放弃对SPE柱的再生。
笔者曾经对Varian公司的Bond E1ut Certify SPE柱重复使用的可能性进行过一些探讨,样品是血浆,3 mL SPE柱。在完成固相萃取后,立即对SPE柱进行再生处理。步骤如下:
(a)用2 mL甲醇及4 mL HCI(1%,体积比)洗涤使用过的SPE柱;
(b)对萃取柱进行真空干燥(36.75 cm Hg,2 min),除去吸附剂中的水分;
(c)用10 mL去离子水洗涤萃取柱;
(d)对萃取柱进行真空干燥(36.75 cm Hg,2 min),除去吸附剂中的水分;
(e)用2 mI。甲醇洗涤萃取柱;
(f)对萃取柱进行真空干燥(36.75 cm Hg,2 min),除去吸附剂中的水分;
(g)将处理好的萃取柱两头用封口膜密封保存。
Bond Elut Certify是以硅胶为基质的混合型SPE柱。具有C8及苯磺酸基官能团。由于在萃取过程和SPE柱再生过程中不断地使用酸碱,对硅胶会有一定的水解作用。因此,Bond Elut certify SPE柱在这种条件下的使用次数不宜超过4次。对SPE柱的再生处理,最好是在第一次使用完后马上进行处理。再生处理后的SPE柱如果不是马上使用,应该用封口膜将其两头的开口密封,或放置在密封的容器内保存。笔者曾经对再生处理的SPE柱密封存放六个月后使用,依然可以得到满意的回收率。
C18反相柱的再生可以参考以下步骤进行,每步溶剂用量至少为柱体积的十倍:
(a)SPE程序中所用的洗脱溶液;
(b)甲醇;
(c)水;
(d)乙腈;
(e)乙腈/异丙醇(75:25,体积比);
(f)异丙醇;
(g)二氯甲烷;
(h)正己烷。
由于二氯甲烷、正己烷水溶性差,在使用前应该先用异丙醇作为过渡溶液对SPE柱淋洗,否则,水溶性差的有机溶剂不能正常发挥作用。
也有人报道SPE柱可重复使用10次。新型的薄膜型固相萃取柱的再生相对较为容易,反复使用的次数也会多一些。Patel等报道了对交联乙烯吡啶聚合物SPE柱Polysorb MP-2进行再生,重复使用的结果,发现这种聚合物萃取柱在经过2 mL 0.5 mol/L NaOH、5 mL H2O及2 mL乙腈再生后可以重复使用10次。
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