北京普天同创生物科技有限公司
在固相萃取的SPE柱预处理、样品过柱、SPE柱洗涤/干燥、目标物洗脱这几个步骤中,都涉及流速问题。其中,对萃取结果影响最大的是样品过柱的流速和洗脱溶液过柱的流速。
样品过柱的流速不能过快,应该保证目标化合物有足够的时间与吸附剂官能团之间充分地发生作用,使目标化合物被保留在SPE柱上。然而,并不是流速越慢越好。流速慢虽然可以增加目标化合物与吸附剂官能团之间的作用,但同时也给样品中的杂质更多的机会保留在SPE柱上。
另外,流速过慢会导致整个固相萃取时间增加,降低效率。因此,我们需要找到流速的临界点,超过这个临界点,回收率就会有明显地降低。
例如,我们要求达到90%的回收率,那么以此时的流速为基点,开始增加流速,直到回收率开始降低。回收率开始降低时的流速就是临界点流速。也就是说,只要样品过柱的流速不超过临界点,回收率就不会有明显影响。换句话说,只要不明显影响回收率,样品过柱的流速越快越好。
对于洗脱溶液过柱的流速,也应该遵循同样的原则。在不影响回收率的前提下,越快越好。
这里主要是指洗涤溶液的体积和洗脱溶液的体积。对于洗涤溶液体积,应该遵循在保证最大限度地洗脱干扰杂质的前提下,体积越小越好的原则。
而洗脱溶液的体积,则应该遵循在保证回收率的前提下,体积越小越好的原则。因为在固相萃取过程中所用溶液的体积越小,过柱花费的时间就越短,效率也就越高。
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