Anderson等在研究癌症化学治疗过程中的磷脂酰肌醇循环过程产生的包括IPl、IP2、IP3在内的多种肌醇磷酸中，应用3H—IP为标记物来分离癌细胞中的多种肌醇磷酸，建立固相萃取方法并确定在SAX阴离子交换柱上分步洗脱的条件。Rudaz等通过检测他125I-美沙酮标记物来评估碱性药物在固相萃取过程中的行为。

在建立固相萃取方法和方法优化过程中，我们一直关注的问题是：目标化合物在哪里?目标化合物是否按照我们设计的方案被有效地分离出来，是否在萃取过程中流失了?如果是流失了，是在哪一个环节流失的?只有找出流失环节才能对方法进行改进和优化。在上一节，我们讨论了对固相萃取方法进行优化的常规方法。下面介绍一下放射性同位素示踪在固相萃取方法优化中的应用。

笔者及其同事曾在建立血中吗啡固相萃取方法的过程中，利用3H标记吗啡作为示踪物监测其在整个固相萃取过程中的轨迹，并根据其轨迹改进固相萃取方法，在较短的时间里完成了血中吗啡固相萃取方法的建立及优化工作。

在对血样中的吗啡进行固相萃取前，必须对样品进行适当的处理，以使血样中的吗啡呈自由状态，并除去可能造成SPE柱堵塞蛋白质、细胞碎片等大分子。为了比较硫酸锌一甲醇、乙腈、甲醇蛋白质沉淀法及超声波破碎／离心法等四种血样预处理方法，我们在血样中添加了不同浓度的吗啡及少量的3H-吗啡(0.09ng／mL)。对经过上述四种方法处理的血样进行固相萃取，然后用液体闪烁计数仪测定洗脱馏分中的放射性强度(dpm)并计算回收率。在四种样品前处理方法中，前三种都属于蛋白沉淀法。实验结果表明回收率在10.8％～31.3％，这主要是吗啡与蛋白质共沉淀所造成的。而超声波破碎／离心法的回收率在74％，所以选定为全血样品的预处理方法。

Varian公司推荐固相萃取方法：

柱预处理：2 mL甲醇，2 mL缓冲溶液(pH 6.0)。

样品添加：将处理好的血样过柱(Bond E1ut Certify，3 mL／200 mg)，流速约1.5 mL／min。

柱洗涤：2 mL去离子水，1 mL乙酸缓冲溶液(pH4.0，0.1 mol／L)，2mL甲醇。

柱干燥：真空干燥2 min。

目标物洗脱：2 mL 2％(体积分数)氨水一二氯甲烷／异丙醇(80:20，体积比)，流速0.5 mL／min。