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QuEChERS萃取方法简要介绍

发布时间:2014-11-18 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:3871

QuEChERS(发音同catchers)是Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,Safty的缩写,即为:“快速、简易、廉价、有效、稳定、安全”的萃取方法。该方法是Anastassiades等于2002年在首先在EPRW会议提出,并于2003年正式发表的一个用于农产品中多农药残留物分析的前处理方法。Anastassiades等最初旨在针对水果、蔬菜、谷物等低脂农产品而建立一个快速、低花费的多农药残留物样品前处理方法。d-SPE在该方法中被应用于除去样品中的杂质干扰物。该方法已经得到AOAC和欧盟农残监测委员会的认可,并且在食品安全检测实验室得到广泛的使用。目前,一些厂商可以提供QuEChERS萃取的试剂包,例如,艾杰尔、西格玛、Restek、UCT等公司。QuEChERS具体方法如下:

第一步:粉碎样品

取10~15 g样品切成大约3 cm×3 cm大小的块状,然后放入-18℃的冷藏柜中冷冻过夜。在低温下对样品进行匀浆。

由于样品的用量只有10~15 g,必须注意样品的代表性。因此,正确采样十分关键。为了确保样品的代表性,采样量不应少于1 kg。样品必须充分地混合均匀,然后取10~15 g进行检测。为了减少挥发性农药残留物的损失,建议在匀浆过程中加入干冰。如果样品含水量在25%~80%之间,要加入一定量的水使得样品中水的含量达到10 g(以10 g样品为例)。如果样品含水量小于25%(例如,干果、面粉及蜂蜜),应该适当减少样品的用量,并加入一定量的水。注意,加人的水的温度应该在4℃左右,以中和加盐所产生的热量。

虽然丙酮和乙酸乙酯也可以作为萃取溶剂,但实验表明乙腈最适合。因为在加入盐后,乙腈比丙酮更加容易与水相分层。乙酸乙酯虽然比乙腈容易与水分层,但是乙酸乙酯的共萃取物较多,另外对酸l生农药的萃取回收率偏低,而且在下一步分散固相萃取时得到的溶液没有乙腈干净。

盐的加入有利于有机相与水相的分层。同时,盐析效应有利于目标化合物更多地分配在有机相中。为了促使有机相与水相分层,需要加入过饱和的硫酸镁。而氯化钠的加入则有利于控制萃取溶剂的极性以减少共萃取物的含量。氯化钠的用量必须注意,过多的氯化钠会影响有机溶剂对极性目标化合物的萃取。

大多数农药在酸性条件下较为稳定。对于大多数样品而言,柠檬酸缓冲盐的加入使得样品溶液的pH在5~5.5之间。该pH范围既有利于农药残留物的定量萃取,又可以防止酸性或碱性不稳定农药残留物的损失。如果样品本身是富酸性的(pH<3),可以视其酸度适当加入5 mol/L氢氧化钠。例如,柠檬、酸橙和葡萄加入600μL,树莓加入200μL。为了防止硫酸镁遇水结块,在加入盐后立即剧烈振荡数秒。

注意,由于含有酸基的农药(例如:phnoxyalcaraoic acids)会与PSA结合,如果要检测的样品中具有这类化合物,就不能进行接下来的PSA分散固相萃取净化。而是直接进行LDMS/MS分析。

第三步:分散固相萃取

在一次性的聚乙烯离心试管中按每毫升萃取液加入25 mg PSA吸附剂和150 mg硫酸镁的比例加入适量的PSA和硫酸镁,然后将一定量的有机萃取液转移至试管中。剧烈振荡30 s,3000 r/rnin离心5 min。将清液转移至带盖样品瓶中,并迅速用5%(体积分数)乙酸(用量为10μL/mL清液)将pH调节至5左右。

由于在第二步萃取/分离的到的萃取物中含有脂肪和蜡状物等共萃取物,这些物质会对GC分析的稳定性产生负面的影响,因此必须除去,QuEChERS采用的是d-SPE除去杂质。加入分散的固相萃取吸附剂的目的是要吸附萃取液中的杂质,而不是目标化合物。PSA可以吸附极性有机酸及一些糖和脂类杂质。如果脂肪类物质较多,可以先将萃取物放在低温下约1 h,使脂肪凝固并除去。残留的共萃取物可以通过上述:PSA+硫酸镁d-SPE除去。也可以在用PSA进行d-SPE的同时加入一定量的C18或C8以更有效地除去脂肪。添加量分别是每mL萃取液25及50 mg。

对于胡萝卜素或叶绿素含量高的样品,在进行分散固相萃取时,除了PSA外,还可以加入一定量的GCB,并将振荡时间延长至2 min。注意,由于GCB对具有平面结构的农药具有很强的亲和力,GCB的用量一定要适当控制。根据Anastassiades等的实验,只要肉眼还能够观察到萃取液中的色素,GCB的用量就不会导致这些农药明显的损失。例如,对于胡萝卜、莴笋等,GCB的用量在2.5 mg;而对于甜青椒、菠菜等则可加入7.5 mg GCB 。

在萃取液中加入适量的乙酸可以对一些农药起到稳定作用,另外也可以改善一些农药在GC色谱柱中的拖尾现象。

通过QuEChERS萃取方法对250种农药的萃取检测,表明该方法对于不同基质的样品回收率在70%~110%。

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