1.高效液相色谱法测定(依据GB/T5009.29-2003第二法)。

(1)原理试样加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。

(2)试剂

①甲醇：经滤膜(0.5um)过滤。

②稀氨水(1+1)：氨水加等体积水混合。

③乙酸铵溶液(0.02mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45um滤膜过滤。

④碳酸氢钠溶液(20g/L)：称取2g碳酸氢钠(优级纯)，加水至100mL，振摇溶解。

⑤苯甲酸标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。

⑥山梨酸标准储备溶液：准确称取0.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。

⑦苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各10.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/mL。经0.45um 滤膜过滤。

(3)仪器高效液相色谱仪(带素外检测器)

(4)操作步骤

①试样处理：

a.汽水：称取5.00～10.0g试样，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)调pH约7。加水定容至10～20mL，经滤膜(HA 0.45um)过滤。

b.果汁类：称取5.00～10.0g试样，用氨水(1+1)调pH约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经0.45um滤膜过滤。

c.配制酒类：称取10.0g试样，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1+1)调pH约7，加水定容至适当体积，经0.45um滤膜过滤。

②高效液相色谱参考条件：

色谐柱：YWG-C₁₈ 4.6mm×250mm，10um不锈钢柱。

流动相：甲醇：乙酸铵溶液(0.02mol/L)(5：95)。

流速：1mL/min。

进样量：10uL。

检测器：紫外检测器，230nm波长，0.2AUFS。

③测定：根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

(5)结果计算

式中x——试样中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg

m₁——进样体积中苯甲酸或山梨酸的质量，mg

V₁——试样稀释液总体积，mL

V₂——进样体积，mL

m₂——试样质量，g

计算结果保留两位有效数字。

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

(6)要点提示

①本法适用于酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸、苯甲酸含量的测定。

②本方法可同时测定糖精钠。

2.薄层色谱法测定(依据GB/T5009.29-2003第三法)。

(1)原理试样酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。将试样提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开。显色后，据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值与标准比较定性，并可进行概略定量。按下式计算：

式中x——试样中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg

m₁—测定用试样液中苯甲酸或山梨酸的质量，mg

V₁——加入乙醇的体积，mL

V₂——测定时点样的体积，mL

m₂——试样质量，g

10——测定时吸取乙醚提取液的体积，mL

25——试样乙醚提取液总体积，mL

(2)要点提示本方法可同时测定果酱、果汁中的糖精。

相关链接：饮料中山梨酸、苯甲酸含量的测定（二）

文章来源：《食品理化检测技术》

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