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优化洗涤步骤和洗脱参数

发布时间:2014-11-19 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:554

此处的干扰物是指影响对目标化合物进行分析的物质以及对检测仪器会产生负面影响的物质。对于不同的检测手段,干扰物也会有所不同,因此,在考虑除去干扰物时必须将检测仪器的因素考虑进去。在优化洗涤步骤中,可能需要测试不同的洗涤溶液及洗涤溶液的用量(体积)。由于洗涤溶液的流速对最后的结果影响不大,可以不必过多考虑。应用自动化固相萃取系统,我们可以十分方便地改变每个实验流速和体积参数,以得到最佳的洗涤效果。

许多因素都会影响最后的回收率。在这里,我们以洗脱步骤为例。要得到满意的回收率,我们必须回答一系列的问题。例如,哪种溶剂洗脱效果最好,其体积和流速为多少最为合适。当我们根据第5章的指引初步选择了几种洗脱溶液后,接下来的工作就是通过实验来证明哪些参数最为合适。除非是使用统计学的方法确定实验参数,一般每次实验只改变一个参数。例如,A、B、C、D四种溶剂,每次选择一种,而洗脱溶液的体积和流速保持不变。如此一来,实验的次数少则几个,多则几十个,工作量不小。由于GX-271 ASPEC可以进行多个样品的连续萃取(最多108个样品,使用1 mL SPE柱;最多60个样品,使用3 m萃取柱;最多45个样品,使用6 mL萃取柱),而Trilution LH软件可以将不同的萃取方法(不同参数)列表并连续运行。

例如,Sarraple List中的方法一使用的洗脱溶剂是二氯甲烷,方法二是乙酸乙酯,方法三是甲醇。通过比对不同溶剂的洗脱回收率,可以确定哪种溶剂最为合适。同样,我们可以将流速设为变量,通过改变洗脱溶剂的流速,得到最佳的洗脱流速。我们可以让仪器来执行这一系列的重复操作,直至得到满意的回收率为止。而且由于仪器可以在无人监管下自动运行,我们完全可以在下午下班之前启动优化程序,让其在夜间按预先设定的参数进行运行。这样既不会影响白天的日常工作,还可以利用夜间完成固相萃取条件优化的工作。如果将固相萃取仪与相应的分析仪器连接,还可以直接给出分析报告,大大提高了工作效率。

GX-271 ASPEC具有多组分分步收集的功能,这对于选择最佳洗脱溶剂的体积十分方便。在进行多组分收集时,仪器将第一次的洗脱溶液收集在第一支试管当中,然后自动向后位移一行,进行第二次洗脱,与此类推。在使用3 mL SPE柱时,可以收集五个组分。使用1 mL SPE柱时,可以收集9个馏分。在优化洗脱溶剂体积时,分若干次将洗脱溶剂加入到SPE柱中,每次过柱的馏分都单独收集,然后分别测定回收率。我们用2.5 mL洗脱溶剂,分五步对苯巴比妥、卡巴咪嗪和苯妥英进行洗脱,每个馏分250μL。可以看到,对于三种药物的混合物,要得到90%以上的回收率,洗脱溶剂的用量在2 mL左右较为合适。但是如果样品中只有苯巴比妥一种药物,洗脱溶剂的用量就可以减少至1.5 mL。

由此可见,自动化固相萃取系统不仅可以用于日常的样品前处理,而且还可以用于固相萃取参数的优化。如果将固相萃取仪与分析仪器连接,例如SPE—GC或SPE—HPLC,就可以在完成固相萃取后,自动将每个收集的馏分注入分析仪器进行分析,大大提高了固相萃取参数优化的效率。

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