北京普天同创生物科技有限公司
四物汤是中药中经典的补血、养血方剂,由白芍、当归、川芎和熟地黄四味中药组成。白芍的主要有效成分是芍药内酯苷(Al biflorin)及芍药苷(Paeoni—florin)。Sheng等建立了大鼠血清中芍药内酯苷和芍药苷的固相萃取一液相色谱检测方法,并用该方法对口服四物汤的大鼠血清中的芍药内酯苷和芍药苷进行动力学监测。其固相萃取方法如下:
固相萃取柱:Extract—Clean C18非极性柱,Alltectl公司。
柱预处理:甲醇,去离子水。
样品过柱:4 mL大鼠血清。
柱洗涤:去离子水。
目标物洗脱:60%(体积分数)甲醇水溶液。
浓缩再溶解:收集的馏分在30℃下浓缩至干,再溶解于240μL液相色谱流动相。
HPLC分析:色谱柱ODS-3 C18反相柱,RPl8预柱,流动相:0.03%(体积分数)甲酸/乙腈(83:17,体积比),流速:1 mL/min,UV检测器波长:230 nm。口服四物汤15 min时大鼠血清固相萃取物的色谱图。血清中芍药内酯苷和芍药苷的平均回收率为89.75%和85.82%。
样品提取:称取均匀粉碎的样品约2.5g,加入15 mL乙腈,在快速匀浆机上混匀1 min,加入2g氯化钠,再匀浆1 min,离心5 min,吸取上清液于150mL鸡心瓶中,重复提取两次,合并上清液,40℃浓缩至1~2 mL。
固相萃取净化:C1eanert TPH 1g/12 mL,Agela公司。
柱预处理:10 mL正己烷+丙酮(4:6,体积比)。
样品过柱:上述浓缩样品过柱,收集过柱液体。
目标物洗脱:25 mL正己烷+丙酮(4:6,体积比),洗涤;收集过柱液体。
浓缩定容:合并收集液体,40℃浓缩至近干,正己烷定容至l mL;供气相色谱一质谱测定。
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