(2)净化方法

目前AGs残留检测中的净化方法主要有液液分配法(LLP)、固相萃取法(SPE)、分子印迹技术(MIT)以及在线痕量富集技术等。

1)液液分配(liquid liquid parition， LLP)

由于AGs的强极性，在酸性pH范围内不能被提取到有机相中，仍保留在水相。LLP法可以将有机干扰成分从水相直接转入有机相中，减少杂质对色谱峰的影响。Schermerhorm等使用30%三氯乙酸沉淀牛奶中的蛋白质形成水相，再先后使用二氯甲烷、正己烷和乙酸乙酯进行LLP净化，去除水相中的杂质，HPLC检测。在100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL添加水平，方法平均回收率分别为80%、76%和77%，变异系数(CV)分别为18%、6%和9%。

2)固相萃取(solid phase extraction， SPE)

SPE作为样品前处理技术，在实验室已得到广泛应用，利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体以及干扰化合物分离，再通过洗脱液洗脱或加热解吸附等方法，得到被净化和富集的目标化合物。

Cabanes等建立了生物体液中庆大霉素的分析方法。用硅胶柱从血浆和尿液中分离庆大霉素，再用邻苯二醛柱前衍生，妥布霉素作内标物，HPLC-荧光检测器(FLD)测定。方法LOD达0.3 mg/L；在0～10mg/L浓度范围，线性关系良好。

崔阳等建立了猪可食性组织(心、肝、肺、肾、肌肉和脂肪)中林可霉素和庆大霉素的超高效液相色谱-电喷雾串联质谱(UPLC-ESI-MS/MS)的同时测定方法。样品经2%三氯乙酸溶液提取，C₁₈固相萃取柱净化后，采用UPLC-MS/MS进行定性和定量分析。2种药物分别在0.01～2mgkg浓度范围内线性良好，相关系数R2均大于0.999；以高、中、低三个浓度水平进行添加回收率实验，平均回收率在76%～89.4%之间，RSD为8.1%～11.4%，林可霉素和庆大霉素的LOD分别为0.005mg/kg.0.018mg/kg。

Kaufman等用三氯乙酸提取猪肉、鱼和牛肝中的11种AGs并沉淀蛋白质，采用弱阴离子交换SPE柱净化提取液，除去酸性杂质，再用LC-MS/MS检测。高选择性固相萃取步骤净化提取物，尽可能减少对质谱信号的抑制。该方法LOD为15～40ppb。

姜莉等采用磷酸溶液提取牛奶中链霉素，提取液用苯磺酸阳离子交换柱和C₁₈固相萃取柱净化，链霉素用甲醇从C₁₈固相萃取柱上洗脱，经浓缩蒸干，残渣用0.01mo/L庚烷磺酸钠溶解，用柱后衍生HPLC-FLD检测。在0.01～0.10mg/kg的添加水平下，方法回收率为78.3%～80.2%，CV为7.4%～12.4%；方法LOD为0.005mg/kg。

3)分子印迹技术(molecular imprinting technology， MIT)

当模板分子(印迹分子)与聚合物单体接触时会形成多重作用点，通过聚合过程这种作用就会被记忆下来，当模板分子除去后，聚合物中就形成了与模板分子空间构型相匹配的具有多重作用点的空穴，这样的空穴将对模板分子及其类似物具有选择识别特性。可以将这种选择识别特性应用于药物的识别与净化。

Ji等以甲基丙烯酸为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，链霉素为模板分子制备了分子印迹聚合物(MIP)。与非印迹聚合物(NIP)相比，该MIP对链霉素、双氢链霉素、庆大霉素和大观霉素具有高的吸附能力和识别特异性。将该MIP作为SPE柱填料，用于净化蜂蜜样品中的4种AGs。经LC-MS/MS测定，链霉素、双氢链霉素、庆大霉素和大观霉素的LOD分别为4.5ug/kg、1.8ug/kg、2.4μg/kg、6.0ug/kg，LOQ分别为15ug/kg、6ug/kg、8ug/kg、20ug/kg；方法回收率在90%～110%之间，日内和日间RSD分别为4.4%～12.0%和6.8～14.6%。

4)在线自动净化(automate online clean up)

Babin等报道了一种在线检测牛肝脏、肾脏以及肌肉组织中的双氢链霉素、庆大霉素和新霉素的LC-MS/MS方法。采用自动净化/分析系统，可以在6h内完成24个样品的检测。样品提取液加入离子对试剂后，通过在线反相SPE柱净化，接着在Nucleosil C₁₈色谱柱上分离，采用LC-MS/MS检测。这种在线自动净化非常简单，并且可以减小离子抑制/增强效应，可以对牛组织中的3种AGs准确定量。该方法在50～5000ppb范围呈良好线性；肾脏样品中双氢链霉素、庆大霉素和新霉素的回收率分别为76%、57%和51%，LOD为0.1ug/kg、0.1ug/kg、0.4ug/kg。

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文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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