6)液相色谱-质谱联用法(liquid chromatography-mass spectrametery， LC-MS)

质谱仪是目前兽药残留分析中灵敏度最高的检测仪器，同时还可以进行化合物的结构鉴定。而色谱-质谱联用法是目前对复杂样品进行定性、定量分析的最佳方法。在兽药残留检测应用中，由于目标物浓度低、样品基质复杂，液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术已成为残留分析的主要发展方向。AGs因其结构中含有多个伯胺或仲胺基团而呈弱碱性，在质谱上有较强的正离子响应，用正离子方式检测比负离子方式有更高的灵敏度。常用的质谱电离源有电喷雾电离源(ESI)和大气压化学电离源(APCI)，而ESI源更适合溶液中极性较强、呈离子态的AGs。

A.电喷雾电离(ESI)

Granja等采用LC-MS/MS测定蜂蜜中的链霉素。色谱分离采用GeminiC₁₈柱(50mm×2mm)，5 mmol/L七氟丁酸(HFBA)-乙腈(85+15，v/v)为流动相，流速0.2mL/min，在ESI正离子模式下，多反应监测(MRM)采集数据。该方法在5ug/kg、10ug/kg、15ug/kg和20ug/kg添加浓度下，回收率可以达到近100%，检测限可达到4.7ug/kg。Cherlet等开发了牛组织和牛奶中双氢链霉素的残留分析方法。组织样品用10mmol/L的磷酸盐缓冲液(含2%三氯乙酸)提取，奶用50%三氯乙酸稀释，经CBASPE柱净化后，用LC-MS/MS测定。色谱柱为Nucleosil(5um)C18柱，流动相为20 mmol/L HFBA和乙腈，ESI电离，MRM检测，链霉素为内标定量。组织和牛奶的LOQ分别为10 ng/g和1ng/mL，LOD为1.9～4.2ng/g和0.6ng/mL。van Bruijnsvoort等建立了蜂蜜和牛奶中的链霉素和双氢链霉素的LC-MS/MS分析方法。用含有庚烷磺酸钠的磷酸盐提取，SPE净化，LC-MS/MS在ESI源电离测定。蜂蜜中两种药物的LOQ分别为2ug/kg和1ug/kg，牛奶中分别为10 ug/kg和5ug/kg。Bogialli等用MSPD提取牛奶中的链霉素和双氢链霉素，LC-ESI-MS/MS测定。该方法外标法定量的回收率在70%～92%之间，内标法定量的回收率在80%～107%之间，RSD小于11%；LOQ在2～13ugL之间。

Heller等报道了牛血浆、牛奶和牛肾样品中庆大霉素的LC-MS/MS测定方法。样品用三氯乙酸提取，经C₁₈柱净化后，LC-MS/MS检测。流动相中加入三氟乙酸，可以洗脱所有的分析物。串联质谱在ESI正离子、选择反应监测(SRM)模式测定。血浆和尿样品用妥布霉素为内标定量，奶和肾脏用外标法定量。3种样品中庆大霉素的LOQ分别为3.3ng/g、4.5ng/g和26ng/g；线性范围分别为1～5000 ng/mL、2.5～2500ng/mL和10～50000ng/g。

Kajita等采用LC-MS/MS同时检测牛奶中9种AGs，包括链霉素、双氢链霉素、大观霉素、新霉素、卡那霉素、庆大霉素、越霉素A、阿泊拉霉素和妥布霉素。用0.01mol/L含2%三氯乙酸的磷酸二氢钾溶液提取，经混合型阳离子交换柱(Oasis WCX和MCX)净化，LC-MS/MS检测。色谱柱为TSK-gel VM pak 25(50mm×2.0mmi.d.)，流动相为0.1%甲酸和含0.1%甲酸的乙腈，梯度洗脱，ESI电离，MRM模式检测。在0.01ug/g或0.1ug/g添加水平下的回收率为66.1%～110.8%，CV小于17.1%；LOQ为0.01ugg。vanHolthoon等采用甲基化内标法结合LCMS/MS定量测定动物组织中的8种AGs。提取液用弱阳离子交换SPE柱浓缩净化，在C₁₈柱上用离子对色谱分离，进串联质谱检测。肾脏中AGs的线性范围为750～20000ug/kg，回收率为94%～111%，日内RSD为2.5%～7.4%，日间RSD为2.2%～17.3%肌肉中的线性范围为50～10000ug/kg，回收率为83%～128%，日内RSD为2.2%～17.3%。Berrada等建立了一种用ASE提取和LC-MS/MS结合的方法，同时检测肉类中的双氢链霉素、大观霉素、螺旋霉素、链霉素、替米考星和泰乐菌素。用含1mmol/L HFBA和甲醇作为离子对流动相梯度洗脱分离，ESI电离，MRM模式检测，以地红霉素和紫苏霉素作为内标。方法回收率为70%～96%，目标化合物的LOD为1～6ug/kg，日内、日间RSD分别小于15%和16%。Lehotay等开发了一种用来筛选和鉴定牛肾、牛肝和牛肉中9种AGs的高通量定性方法。使用一次性吸管提取净化，由UPLC-MS/MS在3min内分析测定。该方法可以分析新霉素、链霉素、双氢链霉素、壮观霉素、卡那霉素、庆大霉素、安普霉素、丁胺卡那霉素和潮霉素，以及新霉素的降解产物巴龙霉素。妥布霉素被用作内标物。在所有的牛肉组织中，除潮霉素的回收率为61%外，其他AGs的回收率在70%～120%之间；基质提取物中最低校准水平低至0.005g/g，接近筛查的检出限。孙雷等71建立了动物源食品中大观霉素、链霉素、双氢链霉素、丁胺卡那霉素、卡那霉素、安普霉素、庆大霉素和新霉素等8种AGs残留的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法。采用KHPO4溶液振荡提取，调节pH7.5～8.0后，过CBX固相萃取柱净化，UPLC-MS/MS测定。8种AGs的LOD为5ug/kg，LOQ为10ug/kg；方法平均回收率为83.0%～114.1%，批内RSD为1.1%～11.4%，批间RSD为2.1%～8.9%。

B.大气压化学电离(APCI)

Hormish等开发了牛肾、肝、肉和脂肪中大观霉素的定量确证分析方法。采用LC-MS/MS分析，反相色谱柱分离，流动相为甲醇和1%乙酸，APCI源电离，监测母离子[M+H]⁺的4个碎片：m/z98、116、158、189。该方法的确证水平可达到0.1ug/g。

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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