15.2.2.1 适用范围

适用于牛奶和奶粉中卡巴氧代谢物喹噁啉-2-羧酸和喹乙醇代谢物3-甲基喹噁啉-2-羧酸残留量的液相色谱-串联质谱测定。方法检出限：喹噁啉-2-羧酸和3-甲基喹噁啉-2羧酸的方法检出限牛奶为0.5μg/kg，奶粉为4.0ug/kg。

15.2.2.2 方法原理

用甲酸溶液消化试样，使牛奶和奶粉中天然存在的酶失活，然后加入蛋白酶水解，盐酸酸化，离心过滤后，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定卡巴氧代谢物喹噁啉-2-羧酸和喹乙醇代谢物3-甲基喹噁啉-2-羧酸残留，内标法定量。

15.2.2.3试剂和材料

甲醇、甲酸：色谱纯；乙酸钠、乙酸乙酯：分析纯。

2%甲酸-乙酸乙酯溶液：向400mL乙酸乙酯中加入10mL甲酸，用乙酸乙酯定容至500mL；0.6%甲酸溶液：量取6.0mL甲酸，用水溶解、定容至1L；0.1%甲酸溶液。量取1.0mL甲酸，用水溶解、定容至1L；甲酸-甲醇溶液(19+1，v/v)：用190mL甲酸溶液与10mL甲醇混合；0.1mol/L盐酸溶液：量取8.3mL浓盐酸，用水溶解、定容至1L；0.3mol/L盐酸溶液：量取25mL浓盐酸，用水溶解、定容至1L；Protease 蛋白酶：SigmaP5147 或相当者，-18℃以下保存：0.01g/mL蛋白酶水溶液：称取1.00g Protease蛋白酶，用水溶解、定容至100mL，4℃保存；10%乙酸溶液：量取100mL乙酸，用水溶解、定容至1L；0.05mol/L乙酸钠溶液：称取6.8g乙酸钠用800mL水溶解，再滴加10%乙酸溶液以调节溶液pH=7，用水定容至1L；乙酸钠-甲醇溶液(19+1，v/v)：用190mL乙酸钠溶液与10mL甲醇混合；甲醇-水溶液(1+4，v/v)；Tris碱：SigmaT1503或相当者：1.0mol/L Tris溶液：称取121g Tris碱，用水溶解、定容至1L，4℃保存。

喹噁啉-2-羧酸、3-甲基喹噁啉-2-羧酸、喹噁啉-2-羧酸-d4标准物质：纯度≥99%。

标准储备液：100mg/L。准确称取适量标准物质，分别用甲醇溶解定容，配成100 mg/L的标准储备液，在-18℃以下保存。

基质混合标准工作溶液：根据灵敏度和使用需要，用空白样品提取液配成不同浓度(μg/L)的混合标准工作溶液，在4℃保存。

内标工作溶液：准确称取适量喹噁啉-2-羧酸-d4标准物质，用甲醇溶解定容，配成100μg/L的标准工作溶液，在4℃保存。

Oasis MAX固相萃取柱或相当者：60mg，3mL。用前分别用3mL甲醇和3mL水活化，保持柱体湿润。

15.2.2.4 仪器和设备

液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源：固相萃取真空装置：吹氮浓缩仪：旋涡振荡器：分析天平：感量0.1mg和0.01g；真空泵；低温离心机：可制冷到4℃，转速大于5000r/min；移液器量程：10～100μL和100～1000uL；聚丙烯离心管：15mL和50mL，具塞；pH计：精度±0.02pH单位。

15.2.2.5样品前处理

(1)试样制备

取不少于500g有代表性的牛奶或奶粉，充分混匀，分为两份，置于样品瓶中，密封，并作上标记。牛奶置于4℃冰柜中避光保存，奶粉则于室温下置于干燥器保存。

(2)提取

a.牛奶样品：准确称取5g牛奶样品(精确到0.01g)，置于50mL聚丙烯离心管中，加入一定量的内标溶液，使其浓度为2.0ng/g，再加入10mL 0.6%甲酸溶液，混匀后，置于(47±3)℃振荡水浴中振摇1h；然后先加入3mL 1.0mol/L Tris溶液，再加入0.3mL蛋白酶水溶液，充分混匀后，置于(47±3)℃振荡水浴中酶解16～18h。加入20mL 0.3mol/L盐酸，振荡5min，在10℃以5000r/min离心15min，上清液过滤。

b.奶粉样品：取12.5g奶粉于烧杯中，加适量35～50℃水将其溶解，待冷却至室温后，加水至总重量为100g，充分混匀后准确称取5g样品(精确到0.01g)，置于50mL聚丙烯离心管中，按牛奶样品提取步骤进行处理。

(3)净化

将提取步骤所得溶液以约1mL/min的流速全部通过Oasis MAX固相萃取柱，分别用15mL乙酸钠-甲醇溶液淋洗固相萃取柱，真空抽干15min。再用5mL甲醇、3mL水、5mL 0.1mol/L盐酸和3mL甲醇-水溶液分别淋洗，真空抽干15min，然后用2mL乙酸乙酯淋洗固相萃取柱，弃去全部淋出液，最后用3mL甲酸乙酸乙酯溶液洗脱喹噁啉-2-羧酸和3-甲基喹噁啉-2-羧酸，置于15mL聚丙烯离心管中，在45℃用氮气浓缩仪吹干。准确加入1.0mL甲酸-甲醇溶液溶解残渣，过0.2um滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

(4)空白基质溶液的制备

称取阴性样品5g(精确到0.01g)，按上述提取净化步骤操作。

相关链接：牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧和喹乙醇及代谢物残留量测定线性范围和测定低限

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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