(1)提出问题色谱柱分析运行时，有时会发现标样和样品的色谱峰会随时间加宽，这是否正常?什么原因引起的呢?

(2)分析原因 一般来说，如果保留时间没有很大区别，只是加宽的峰拖尾，可能表明有活化点。如果加宽的峰是对称的，可能是由于正常的色谱柱“损耗和流失”。如果峰前伸，说明色谱柱过载。

这一问题需要从色谱的塔板理论进行解释。塔板理论是色谱学的基础理论，塔板理论将色谱柱看作一个分馏塔，待分离组分在分馏塔的塔板间移动，在每一个塔板内组分分子在固定相和流动相之间形成平衡，随着流动相的流动，组分分子不断从一个塔板移动到下一个塔板，并不断形成新的平衡。一个色谱柱的塔板数越多，则其分离效果就越好。

塔板理论是Martin和Synger首先提出的色谱热力学平衡理论。它把色谱柱看作分馏塔，把组分在色谱柱内的分离过程看成在分馏塔中的分馏过程，即组分在塔板间隔内的分配平衡过程。塔板理论的基本假设为：

①色谱柱内存在许多塔板，组分在塔板间隔(即塔板高度)内完全服从分配定律，并很快达到分配平衡；

②样品加在第O号塔板上，样品沿色谱柱轴方向的扩散可以忽略；

③流动相在色谱柱内间歇式流动，每次进入一个塔板体积；

④在所有塔板上分配系数相等，与组分的量无关。

虽然以上假设与实际色谱过程不符，如色谱过程是一个动态过程，很难达到分配平衡；组分沿色谱柱轴方向的扩散是不可避免的。但是塔板理论导出了色谱流出曲线方程，成功地解释了流出曲线的形状、浓度峰值的位置，能够评价色谱柱柱效。

(3)解决方案 根据塔板理论，待分离组分流出色谱柱时的浓度沿时间呈现二项式分布，当色谱柱的塔板数很高的时候，二项式分布趋于正态分布。

理论塔板高度越低，在单位长度色谱柱中就有越多的塔板数，则分离效果就越好。决定理论塔板高度的因素有：固定相的材质、色谱柱的均匀程度、流动相的理化性质以及流动相的流速等。

a．在色谱柱不变的情况下，即理论塔板数n和长度L都不变的情况下，色谱峰宽度与保留时间￡成正比。或者说：同一次分析里，色谱峰的宽度与其保留时间成正比。因此出峰越晚，峰宽越大。

b．在理论塔板数”不变的情况下，峰高与保留体积(时间)t成反比。或者说：同一次分析中，同样浓度的不同组分，出峰越晚峰高越小。

c．在色谱柱加长的情况下，理论塔板数n和保留体积(时间)t都同时等倍增加，因此色谱峰宽与色谱柱长度的平方根成正比。即色谱柱长增加一倍，峰宽增加到原来的1．414倍。还记得柱长增加一倍，保留时间差增加多少么?这是速度方程的结论，增加一倍。因此分离度R在柱长增加一倍的情况下，只能增加到原来的1．414倍。即：理论塔板高度H不变的情况下，分离度R与柱长的平方根成正比。

d．在色谱柱长度固定的情况下，即保留时间相等的情况下，色谱柱宽度w与理论塔板数”的平方根成反比。这意味着：在同样长度的不同色谱柱上，柱效率”越高，色谱峰越尖锐。通常理论塔板数孢即柱效率咒，但有时也把单位柱长下理论塔板数称为柱效率。由于毛细管具有极高的柱效，因此同样分析时问下，可以看到毛细管色谱峰明显要尖锐得多。

e．色谱峰高与组分总进样量m成正比。因此在进样体积一定的情况下，峰高与组分浓度c成正比，因此峰高可以用来定量。但峰高还会受到保留时间、理论塔板数咒等影响，特别是当色谱峰形不正常、塔板理论不完全成立的时候，这个关系会受到影响，因此通常不用峰高定量。色谱峰面积都和进样量成正比，因此任何时候都能用峰面积定量。只有在峰形良好且尖锐的情况下，用峰高定量比较简单。

(4)案例分析 在DB-Wax柱上分析37种组分FAME参考标准样的典型色谱图。样品的峰随保留时间延长而明显加宽，而且色谱峰的峰高也有明显下降趋势。