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常用pH调整液的配制

发布时间:2015-01-15 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:2085

【实验器材】

(1)仪器电子天平、高压蒸汽灭菌锅、pH计、烧杯、磁力搅拌器、容量瓶、盐水瓶、灭菌过滤器、移液器及配套枪头等。

(2)材料滤纸、称量纸、滤膜。

(3)试剂 NaOH、NaHCO3、羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)、新鲜制备的三蒸水等。

【操作方法与步骤】

(一)NaHCO3的配制

(1)准确称取所需NaHCO3(常用浓度为3.7%、5.6 %或7.4%),用一定量新鲜制备的三蒸水溶解。

(2)用三蒸水定容至所需体积,用0.22μm微孔滤膜滤过除菌。

(3)分装于安瓿瓶中,于4℃冰箱保存备用。

(二)0.5 mol/L HEPES配制

(1)准确称取HEPES 119.15 g,用一定量新鲜制备的三蒸水溶解。

(2)用三蒸水定容至500 mL,用1 mol/L NaOH调其pH至7.5,再用0.22μm微孔滤膜滤过除菌。

(3)分装小瓶,于常温或4℃冰箱保存备用。

(三)配制pH调整液注意事项

(1)NaHCO3每次用一支,并一次用完。

(2)使用NaHCO3要逐滴加入,并不时搅拌,防止局部pH过高。

(3)HEPES使用终浓度为10~50 mmol/L,一般培养液内含20 mmol/L HEPES即可达到缓冲能力。

(4)因为现在市售HEPES为约10 g包装的小瓶,所以可根据实际情况灵活配制,但是要保证培养液内HEPES的终浓度仍然为20 mmol/L。如称取4.766 g HEPES溶于20 mL三蒸水中,过滤除菌后可完全(20 mL)加入1 L培养液中,或者每100 mL培养液中加入2 mL即可。

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