一、方法要点

硒为人体必需的痕量营养元素，人发中的硒能反映人体中含硒水平及健康状况，对其测定具有重要意义，目前对人发中微量元素的分析常用中子活化分析法、发射光谱法、原子吸收光谱法和X射线荧光光谱法等。

本试验应用单质硒对S^2-还原亚甲基蓝褪色反应分光光度法用于人发试样中微量硒的测定。本法灵敏度高，检测限为2．0×10^-8 g/mL，线性范围为2×10^-8～1．0×10^-7 g／mL；精密度高，总硒量为1μg时变异系数小于5％，需用仪器简单，测定快速，选择性好等优点。

二、试剂与仪器

(1)硒标准溶液：称取高纯硒粉配成1mg／mL的贮备液，再用水稀释成1μg/mL的标准溶液。

(2)亚甲基蓝：0．05％溶液。

(3)硫化钠：0.1mol／L溶液。

(4)亚硫酸钠：0.5mo1／L溶液。

(5)EDTA：0.02mol／L溶液。

(6)HNO₃-HClO₄混酸(4：1)。

(7)硼砂-NaOH缓冲溶液(pH9．8)。

(8)分光光度计。

三、分析步骤

在枕部离头皮0.5～0.8cm处剪下头发，经洗涤、烘干，冷至室温后，保存于干燥器中备用。称处理好的人发试样适量，经混酸硝酸一高氯酸(4：1)溶解，加热蒸干。水溶残渣，稀释定容，制成适宜体积的溶液。吸取一定的试液置于25mL比色管中，依次加入硼砂一NaOH缓冲溶液5mL、EDTA2mL、Na2S5mL、Na2SO31mL、10mL三次蒸馏水，摇匀，同时制作空白，置沸水浴中准确加热5min，取出后立即置冷水中冷至室温，分别加入亚甲基蓝0.75mL，同时启动秒表计时，用1cm比色皿，以水为参比，于612nm波长下测其3min时的吸光度A及A0(空白)，求出相对吸光度△A(△A=A0—A)。

四、标准曲线的绘制

取不同量的0．0、0．5、1．0、1．5、2．0、2．5mL硒标准溶液置于25mL比色管中，依次加入硼砂一氧氧化钠缓冲溶液5mL、EDTA2mL、Na2S5mL、Na2SO31mL、l0mL三次水，摇匀。同时制作空白，置沸水浴中准确加热5min，取出后立即置冷水中冷至室温。分别加入亚甲基蓝0．75mL，同时启动秒表计时，用1cm比色皿，以水为参比，于612nm波长下测其3min时的吸光度A及A0（空白)，求出相对吸光度△A(△A=A0—A)，绘制标准曲线。

五、注意事项

(1)Na2S与亚甲基蓝固定时间以3min为宜，此时体系吸光度在0．2～0．6之间。

(2)溶液pH值为9．8时△A最大。

(3)反应中释放出单质硫，干扰测定，加入Na2SO3后，单质硫即转为Na2S2O3，使干扰消除。

(4)加入EDTA可完全掩蔽其他金属离子。