最严格的厌氧菌 ：常温催化除氧式或焦性没石子酸除氧式 。

生长最适温度：28 ℃ ～37 ℃ 酸碱度：pH为6.8—7.6，产毒的最适pH为7.8 ~8.2产毒培养温度：各型菌产毒的最适培养温度不完全相同。C、D型温度高些为宜，35℃ 培养3d即可，而E型菌低温度长时间培养效果较好， 25℃ 培养7~10d。为兼顾其它型，统一采用30℃培养。

菌株分离培养温度：35℃ 48h。 pH为7.5。对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。

增菌产毒培养基：即适于肉毒梭菌发芽、繁殖，又适于产生毒素（庖肉培养基）。呈均匀混蚀生长，肉渣可被A、B和F型菌消化，并发黑，产生腐败恶臭味，产生大量气体。

分离鉴定培养基：卵黄琼脂平板是较好的培养基，由于肉毒梭菌（除G型）产生脂肪酶，分解卵黄中的脂肪，在卵黄琼脂平板上形成的菌落及其周围培养基表面在斜光照射下可见到虹彩薄层，此现象，除A型诺氏梭菌及生孢梭菌外，属于肉毒梭菌所特有，有一定的鉴别作用。

菌落形态：类圆形，边缘不整，直径大约3毫米。菌落突出平板表面，灰白色，表面一般比较光滑也有的呈颗粒状，菌落底部及周围形成甘油二酯的沉淀乳浊环。如果平板表面湿润则菌落界线不明显，向外扩散，常常扩散成菌苔。也可形成绒毛网状菌落。血琼脂平板，血液具有降低氧化还原电位的作用，能促进肉毒梭菌的生长。菌落周围出现大而透明的溶血环（除G型） 。