分光光度计的使用比较简单，以下以岛津UV一1800型分光光度计为例加以简单说明，该仪器可以使用主机上按键操作，也可使用计算机软件进行操作。

(1) 开机检查仪器的各个调节钮的位置是否在正确的位置上，检查确定样品室与池架上没有放置任何物品，打开仪器电源 (将开关打向“I”侧) ，开始执行各种自检及初始化。仪器通过后，使之预热30min，随后即可通过使用主机上按键进行测试操作。

如使用计算机软件进行操作时，需开启打印机、显示器及计算机主机电源，并在UV一1800主机的模式菜单中，按主机面板上按键F4功能键进入PC控制。运行UV Probe 2．31工作软件，点击【Connect】键，连接UV一1800和计算机。

(2) 设置测量方式 UV一1800型分光光度计有多种测量功能，包括动力学测定方式、光度测定 (定量) 方式和光谱测定等。测量前应首先选择测量方式，对于常规的定量分析，应选取光度测定 (定量) 方式。使用UV一1800主机上按键时，按键上有数字键0～9或者功能键F1～F4，可以根据测试需要选择屏幕上不同的模式与设置。选择模式或设置时，在按下数字或功能键之后，不用按ENTER键；当输入数值，比如波长设置或者显示模式等，必须按ENTER键设置该值。如使用软件菜单操作，具体的测量方式选择操作方法如下。

① 点击【Kinetics】键进入动力学测定方式：一般测定吸收值随时间的变化，通常用于酶反应随时间的变化。

② 点击【Photometric】键进入光度测定 (定量) 方式：可进行多波长、单波长、峰高定量。校准曲线可使用多点、单点、K因子等方法。

③ 点击【Spectrum】键进入光谱测定方式：可进行紫外-可见光-近红外区的光谱测定。

(3) 其它参数的设定 点击菜单栏上的【M】键，点击【Measurement】标签，根据提示在对话框中选择波长测定范围、扫描速度、采样间隔等参数；点击【Instrurrlent Parameters】标签，选择测定种类 (吸收值、透射能量、反射率) 及通带 (狭缝) 等条件。

(4) 吸光度的测量先点击【Baseline】进行基线校正，点击【Auto Zero】键进行仪器调零，打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，将参比样品推 (拉) 入光路中，再盖上样品室盖。点击【Start】键即开始测定。完成后，取一个文件名并保存。
点击菜单栏上的【Report】键，根据需要选择报告格式。点击菜单栏上的【Print Preview】键预览，点击菜单栏上的【Print】键，打印输出报告。

(5) 关机在UV Probe界面上点击【Discorlnect】键，并退出操作软件。关闭UV一1800主机的电源开关 (将开关打向“O”侧) 。关闭计算机主机、打印机、显示器及总电源。取出样品池，并将样品池清洗并擦干，置于其专用的盒子。

(6) 比色皿的使用方法 比色皿的使用不当，不仅会大大降低分光光度计测量结果的准确性，给测量结果带来较大的误差，而且可能会损伤比色皿，缩短其使用寿命。

① 拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要接触比色皿的透光面，以免沾污。

② 装盛样品时先向比色皿倒入少量的待测样品进行润洗，再加入其待测样品。以池体的3／4为度，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，应无溶剂残留。当待测样品浓度梯度较多，建议按浓度由低到高的原则，依次向比色皿加入待测样品。

③ 吸收池放入样品室时应注意方向相同。样品溶液放入仪器测量前应注意消除比色皿壁的气泡，并用镜头纸或柔软的棉布擦拭水珠。吸收池使用后，用擦镜纸或软棉织物擦去水分。

④ 测量挥发性或腐蚀性样品时，吸收池应加盖。

⑤ 吸收池使用完毕，应立即洗净并用蒸馏水冲洗清洁，并用干净、柔软的绸布将水迹擦净，以防止表面光洁度破坏影响吸收池的透光率。若吸收池透光内壁沾污，可用柔软绸布，滴上酒精液后，轻轻摩擦，再用蒸馏水冲洗清洁擦净，晾干防尘保存。

⑥ 尽量使用同一比色皿进行标准溶液与样品溶液的测定，以克服不同比色皿本身吸光差异造成的误差；同厚度多个比色皿同时使用时，在进行测试前均应进行校正和检查比色皿是否配套。具体方法为：分别向被测的比色皿里注入同样的溶液，把仪器置于某一波长处，如石英比色皿装蒸馏水在220nm处，将某一比色皿的透光率比值调至100％，测量其它各比色皿的透射比值，记录其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0．5％的范围内则可以配套使用，若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。同样地，可检查石英比色皿的700nm处或玻璃比色皿 (只供340nm以上波长处) 。