作者：张莉，文燕，齐伟明，王敏珠( 国家食品药品监督管理局杭州医疗器械质量监督检验中心，杭州310009)

粘弹剂作为眼外伤手术的辅助剂已得到临床广泛应用，它具有扩张组织间隙、保护眼内组织、推移和分离组织、防止眼内异物冲出及葡萄膜出血等作用，能显著提高眼内手术质量，被称之为内眼手术不可缺少的软性手术工具［1］。粘弹剂的化学特性影响眼科手术中的安全性。目前国内采用ISO 15798–2010《 Ophthalmic implants–Ophthalmic viscosurgical devices》及YY0861–2011《眼用光学眼用粘弹剂》对粘弹剂中含有的特殊化学物质进行分析评价。粘弹剂应为惰性、电解质平衡、与角膜或房水有相同的晶状体渗透压和胶体渗透压、有pH 缓冲体系的水溶液。粘弹剂产品的pH应与房水的pH (7.38) 接近，以防对角膜内皮细胞造成损伤，羟丙甲基纤维素粘弹剂中一般添加乳酸来调节溶液的pH。

乳酸含量的测量方法有比色法、EDTA 滴定法、HPLC 分析法、酶法及GC 分析法等[2–3]。EDTA法及比色法虽简单、快速, 但灵敏度及精密度差；HPLC 法，乳酸峰会受到眼用粘弹剂中高分子聚合物及其它添加剂的干扰，且眼用粘弹剂中含有凝胶状的大分子物质容易污染色谱柱；酶法虽然快速准确, 但实验条件及费用要求较高；气相色谱法，乳酸在气相色谱仪气化室中易发生分解［4］，且眼用粘弹剂中含有高分子聚合物及高沸点盐类物质和水，直接进样会对气相色谱柱造成污染。笔者根据文献［5］将极性强的乳酸转化为极性弱的酯类衍生物，即将样品中乳酸与甲醇酯化反应后，再用氯仿提取，用毛细管气相色谱法测定眼用粘弹剂中乳酸含量，该法重现性好，分离效率高。

1实验部分

1．1主要仪器与试剂

气相色谱仪：6890N 型，美国Agilent 仪器公司；

顶空进样装置：7694E 型，美国Agilent 仪器公司；

氢火焰离子化检测器：美国Agilent 仪器公司；

甲醇：色谱纯，美国TEDIA 试剂公司；

乳酸对照品：97%，天津贝斯医药科技有限公司；

三氯甲烷：色谱纯；

无水硫酸钠、浓硫酸：分析纯；

氢氧化钠标准品：0.01 mol／L，德国默克公司；

超纯水系统：Milli-Q 型，美国Waters 公司；

H2SO4 ：体积分数50%，精确量取10 mL 浓硫酸缓慢加入含有10 mL 水的烧杯中，并不断搅拌，冷却；

酚酞指示剂：1%，在托盘天平上称取1 g 酚酞，溶于60 mL 95% 乙醇中，用水稀释至100 mL，摇匀，转移至试剂瓶中，贴标签备用。

1.2色谱条件

色谱柱：DB–Wax（30 m×0.32 mm，0.5 μm）；

流速：4.1 mL／min ；色谱柱进样口温度：250 ℃；

升温程序：起始温度为70 ℃ , 以5 ℃ ／min 升至100℃，再以25℃／min 升至220℃，保持2 min ；进样方式：不分流进样，0.75 min 后打开分流阀；检测器温度：250℃；H2 流速：30.0 mL／min ：压缩空气流速：350 mL／min ；氮气补气流速：35 mL／min ；

进样体积：1 μL。

1.3实验方法

1.3.1实验原理

将样品在酸性条件下与甲醇酯化反应后，用三氯甲烷萃取，移取萃取液进行GC 分析。

1.3.2样品处理

准确量取样品0.25 g 于10 mL 具塞离心管中，加入0.75 mL 50% H2SO4，再加入2 mL 甲醇，摇匀；

置于(56±2)℃的水浴中酯化0.5 h。取出离心管冷却至室温，加入1 mL 水，摇匀，再加入1 mL 三氯甲烷，振摇3 min，离心分层，弃去上层水溶液，在微型玻璃漏斗（漏斗底部加少许脱脂棉，上铺少许无水硫酸钠）上虑出下层氯仿萃取液，取氯仿层待分析。

1.3.3标准溶液配制

精确称取0.5 g 标样于500 mL 三角瓶中，加入270 mL 水，在沸水浴上回流15～30 min，待其冷却至室温后，即为乳酸标准溶液。准确移取25 mL标准溶液，置于250 mL 锥形瓶中，加酚酞指示剂，用0.01 mol／L 氢氧化钠标准溶液滴定，测定并计算出乳酸标样的浓度，即得乳酸标准储备液。

2结果与讨论

2．1酯化反应催化剂的选择

乳酸酯化反应常用0.5 mol／L 硫酸及三氟化硼为催化剂，三氟化硼毒性大，因此选择硫酸为催化剂。试验了体积分数为98%，50%，30% 的硫酸为催化剂时，对反应的催化效果。确定选择50% 硫酸为酯化反应的催化剂。

2．2反应时间和反应温度选择

反应温度固定在50℃，反应时间选择10，20，30，40，50，60，90 min 进行试验。结果显示，30 min时达到平衡。固定反应时间30 min，反应温度选择30，40，50，55，60，70℃进行试验，确定55℃为最佳反应温度。

2．3色谱条件的选择

在满足系统适应性试验要求下，尽可能使样品中各种成分不在色谱柱中残留并缩短分析时间，在色谱条件的摸索过程中，通过条件试验确定了1.2色谱条件。在此条件下，供试品与对照品色谱图中乳酸甲酯的保留时间(6.70 min) 一致，阴性对照样品溶液色谱图在乳酸甲酯相应位置上未见干扰，理论塔板数达到60 000 以上，分离度均达到理想效果，色谱图见图1。

2．4线性方程、线性范围及检出限

取乳酸标准储备液用水稀释成质量浓度为0.089 4～1.165 2 mg／mL 的系列标准溶液，分别精确移取1 mL 加入10 mL 具塞离心管，按照1.3.2 方法处理，并在1.2 色谱条件下进行分析。由乳酸溶液质量浓度(c) 对峰面积(A) 进行线性回归，得回归方程A=7.963c+3.258×10–3。在0.089 4～1.165 2 mg／mL 范围内，线性关系良好，线性相关系数r=0.999 6。对空白样品连续测定7次，测定结果的相对标准偏差(s) 为0.047 8 μg/mL，查表得t(n-1，0.99)=3.14，检出限MDL=s t(n-1，0.99)=0.15μg／mL。

2．5精密度试验

配制质量浓度为0.191 mg／mL 的乳酸对照品溶液，连续测定6 次，结果见表1。由表1 可知，测定结果的相对标准偏差为1.97%，表明方法的精密度良好。

2．6回收试验

分别精密移取乳酸标准溶液（0.954 mg／mL）0.4，0.5，0.6 mL 至10 mL 容量瓶中，加入0.25 g 不含乳酸的眼用粘弹剂赋形液定容至刻度，得到含不同浓度的加标溶液，按实验方法测定其中乳酸含量，同一浓度连续测定6 次，结果见表2。由表2 可知，方法回收率为97.8%～98.8%，说明方法的准确度较高。

2．7日间重复性

为了验证该方法对样品进行测定时检测结果的稳定性，分别对奥地利CROMA-PHARMA 公司生产的2 批眼用粘弹剂样品进行连续3 天测定，乳酸含量测定结果见表3。由表3 可知，测定结果的相对标准偏差小于2%，说明该方法对眼科手术粘弹剂实际样品中乳酸含量测定时，检测结果的稳定性良好。

3结语

采用毛细管气相色谱法测定眼科手术粘弹剂中乳酸含量，由于眼科手术粘弹剂中含有高分子聚合物、高沸点的盐类物质及水，直接进样会造成气相色谱柱被污染，为此先对粘弹剂中乳酸甲醇酯化反应后再进行测定。该方法没有干扰, 重现性好，精密度及回收率满足实验要求。

参 考 文 献

［1］袁佳琴. 人工晶体植入术图谱［M］. 北京：人民卫生出版社，1998: 185.

［2］李黎，曹振东，付世建. 力竭性运动后鲇鱼幼鱼乳酸、糖原和葡萄糖水平的变动［J］. 水生生物学报，2007，31(6): 880–885.

［3］苏国岁，何爱民. 气相色谱– 质谱法测定卷烟烟气总粒相物中的乳酸［J］. 分析试验室，2006，25(1): 46–48.

［4］Martin J Playne. Determination of Ethanol，Volatile Fatty Acid，Lactic and Succinic Acid in Fermentation Liquids by Gas Chromatography［J］. J Sci Food Agric，1985，36: 638–644.

［5］陈钧辉，李俊，张太平，等. 生物化学实验［M］. 科学出版社，2002: 18.