维生素B6实际上包括吡哆醇(PN)、吡哆醛(PL)、吡哆胺（PM）三种衍生物，三种形式间通过酶可互相转换。最常见的市售维生素B6是盐酸吡哆醇。维生素B6参与100余种酶反应，在氨基酸代谢、糖异生作用、脂肪酸代谢和神经递质合成中起重要作用，还与机体免疫功能有关。吡哆醛、吡哆醇和吡哆胺性质相似，它们易溶于水和乙醇，在酸性溶液中稳定，在碱性溶液中易被分解破坏，对光敏感，所以进行实验时需要避光。

维生素B6广泛存在于各种动植物食品中，但一般含量不高。酵母及鸡肉、鱼肉等白色肉类含量最高，小麦、玉米、豆类、葵花子、核桃、水果、蔬菜及蛋黄、肉类、动物肝脏等含量也较多。

测定维生索B6的方法有微生物法、荧光法和高效液相色谱法等。其中，微生物法是经典法，它的优点是：特异性高、精密度好、准确度高、操作简便、样品不需要提纯。其缺点是：耗时长、必须经常保存菌种、试剂较贵。荧光法样品需经提纯，操作复杂。高效液相色谱法是目前最先进简便的方法。GB/T5009.154-2003采用的是微生物法，故这里只介绍微生物法。

微生物的生长与它们对某些特定的维生素的需求有关，因此在微生物分析法中，将某些微生物在含维生素的样品抽提液中的生长速率，与在含已知量维生素对照溶液中的生长速率进行对比，从而得出样品中该维生素的含量。受试微生物可用细菌、酵母等，生长速率可通过测定浊度、产酸量、质量变化或呼吸作用，其中，浊度分析（或光密度）是最常用的方法。维生素B6的含量在2ng/mL以内，其浓度对卡尔斯伯酵母菌的生长速率有良好的线性关系，可用微生物定量。

(1)菌种的制备与保存：以卡尔斯伯酵母菌（SC）纯菌种接入2个或多个琼脂培养基管中，在（30±0.5)℃恒温箱中保温18一20h，取出于冰箱中保存，至多不超过两星期。保存数星期以上的菌种，不能立即用作制备接种液之用，一定要在使用前每天移种1次，连续2一3d，方可使用，否则生长不好。

(2）种子培养液的制备：加0.5mL50ng/mL的维生素B6标准应用液于尖头管中，加入5mL基本培养基，塞好棉塞，于高压锅121℃下消毒10min，取出，置于冰箱中，此管可保留数星期之久。每次可制备2一4管。

(3）样品制备：取样0.5一10.0g（维生素B6含量不超过10ng）放入100mL锥形瓶中，加0.22mol/LH2SO472mL，放入高压锅121℃下水解5h，取出，于水中冷却，用10mol/LNaOH和0.5mol/LH2SO4调pH至4.5，用溴甲酚绿做指示剂（指示剂由黄色变成黄绿色）。将锥形瓶内的溶液转移到100mL容量瓶中，定容至100mL,滤纸过滤，保存滤液于冰箱内备测（保存期不超过36h)，此为样液。

(4）接种液的制备：使用前一天，将卡尔斯伯酵母菌种由储备菌种管移种于已消毒的种子培养液中，可同时制备两根管，在（30±0.5)℃的恒温箱中培养18-20h。取出离心10min(3000r/min)，倾去上部液体，用已消毒的生理盐水淋洗2次，再加10mL消毒过的生理盐水，将离心管置于液体快速混合器上混合，使菌种成为混悬体，将此液倒入已消毒的注射器内，立即使用。

每个试样各测定管的吡哆醇含量为ρ1ρ2ρ3；取液量分别为V1、V2、V3，各样管的吡哆醇含量ρ为：

样品重为m(g)，取液量为V(mL)，定容至100mL，则样品的吡哆醇含量为：

说明及注意事项如下。

（1)所有步骤需要避光处理。

(2）试管应先用洗衣粉清洗后，用水冲净，再放入酸缸中浸泡1d左右，捞出后再用自来水和蒸馏水清洗干净，晾干，方可再用。