一、实验目的

1．掌握邻二氮菲光度法测定铁的原理及方法。

2.熟悉绘制吸收曲线的方法，正确选择测定波长。

3．学会制作标准曲线的方法。

4．通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁，掌握721型（或722型）分光光度计的正确使用方法，并了解该仪器的主要构造。

二、实验原理

邻二氮菲与Fe2＋在pH为2.0-9.0溶液中形成橙红色配合物。本实验用HAc-NaAc缓冲溶液，pH为5.0-6.0。

配合物的配合比为3：1.。Fe3＋与邻二氮菲作用形成蓝色配合物，稳定性较差，因此在实际工作中常加入还原剂盐酸经胺，使Fe3＋还原为Fe2+，与显色剂邻二氮菲作用，以测定样品中Fe3＋和Fe2十之总量。

三、仪器和试剂

仪器：721型或722型分光光度计，容量瓶（50mL)8支，移液管（10mL)1支，吸量管（5mL)4支。

试剂：

(1）铁标准溶液100μg·mL-1。准确称取0.8634g铁盐NH4Fe(SO4)2·12H2O置于烧杯中，加入20mL6mol·L-'HCl和少量水，溶解后，定量转移入1L容量瓶中，加水稀释至刻度，充分摇匀。

(2)铁标准溶液10μg·mL-1。用移液管移取上述铁标准溶液10.00mL,置于100mL容量瓶中，加6mol·L-1HCl2.0mL，然后加水稀释至刻度，充分摇匀。

(3)10%盐酸经胺溶液（新配制）。

（4）0.1%邻二氮菲溶液（新配制）。

(5)HAc-NaAc缓冲溶液（PH}-5.0)：称取136gNaAc，加水使之溶解，在其中加入120mL冰醋酸，加水稀释至500mL,

四、实验内容及步骤

1.溶液的配制用吸量管吸取铁标准溶液（10μg·L-1)0.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL及试样溶液×.××mL分别放入7个50mL容量瓶中，加入1.00mL10%盐酸经胺溶液、5.00mLHAc-NaAc缓冲溶液和2.00mL0.1％邻二氮菲溶液，加蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀。放置5min,

2.邻二氮菲一Fe2+吸收曲线的绘制用3cm比色皿，以试剂溶液为参比液(0号溶液，即在0.00mL铁标准溶液中，加入相同试剂），利用721型分光光度计，在440-560nn波长范围内分别测定5号溶液的吸光度值。在临近最大吸收波长附近应间隔波长5-10nm测其A值，其他各处可间隔波长20~40nm测其A值。然后以波长为横坐标，所测A值为纵坐标，绘制出吸收曲线，并找出最大吸收峰的波长，以λmax表示。

3．标准曲线的绘制用3cm比色皿，以0号溶液为参比液，选择λmax为测定波长，测1-5号溶液的A值。以铁的质量浓度为横坐标，A值为纵坐标，绘制标准曲线。

4．试样分析

(1)水样分析取1支50mL容量瓶，加入5.00mL（或10mL，铁含量以在标准曲线范围内为合适）未知试样溶液，按实验步骤1的方法显色后，在Am.二处，用3cm比色皿，以试剂为参比液，平行测定A值。求其平均值，在标准曲线上查出铁的质量浓度，计算试样中铁的浓度。

(2)石灰石中微量铁的测定准确称取试样0.4-0.5g（如铁含量较高，则适当减少称样量）于小烧杯中，滴加少量水使之润湿，盖上表面皿，滴加3mol·L-1HCl溶液至试样溶解，将溶液定量转入50mL容量瓶中，用少量水淋洗表面皿及烧杯，一并转入容量瓶中。然后依次加入1mL盐酸轻胺（10%)溶液、2mL 0.10。

邻二氮菲、5mLHAc-NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，摇匀，放置5min。按实验步骤3，测定A值。从标准曲线上查出铁的质量浓度，计算试样中铁的质量分数。
附722型分光光度计的使用方法

(1)将灵敏度旋钮调置“I”档（放大倍率最小）。

(2)开启电源，指示灯亮，仪器预热20min，选择开关置“T"。

(3)打开样品室盖（光门自动关闭），调节“0%T”旋钮，使数字显示“0.00"。

(4)将装有溶液的比色皿放置比色皿架中。

(5)旋动仪器波长手轮，把测试所需的波长调节至刻度线处。

(6)盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示为“100.0"。如果显示不到100%，则可适当增加灵敏度的档数，同时应重复“3”调整仪器的“0.00"

(7)将被测溶液置于光路中，读出被测溶液的透光率（T）值。

(8）吸光度A的测量，参照“3”和“6”调整仪器的“0.00”和“100.0"，将选择开关置于A，旋动吸光度调零旋钮，使数字显示为“0.00"，然后移入被测溶液，显示值即为试样的吸光度A值。

(9)浓度的测量，选择开关由A旋到。，将已标定浓度的溶液移入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测溶液移入光路，即可读出相应浓度值。

(10）本仪器数字显示后背部，装有接线柱，可输出模拟信号。

(11）如果大幅度改变测试波长时，需等数分钟才能正常工作（因长波向短波或短波向长波移动时，光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间）。