噻虫胺检测方法(农产品) |
| 作者： 更新时间：2008-1-24 9:01:43 |
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1．分析目标化合物
噻虫胺
2．仪器设备
带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪（HPLC/UV）和液相色谱-质谱仪(LC/MS)。
3．试剂
除下列试剂外，使用附录2所列试剂。
噻虫胺标准品：含噻虫胺99％以上，熔点为176.8℃。
苯磺酰基丙基甲硅烷基化硅胶小柱（1000mg）：在内径8～9 mm聚乙烯管中填充苯磺酰基丙基甲硅烷基化硅胶或具有同等分离性能的物质。
4．试样溶液的制备
1）提取方法
① 谷类、豆类和种子类
称取10.0g样品，加入20mL水，放置2小时。加入100 mL丙酮，均质3分钟后，抽滤。取出滤纸上残留物，加入50mL丙酮均质，按上述同样过滤。合并所得的滤液，40℃以下浓缩至约30mL。
加入100mL 10％氯化钠溶液，用100mL正己烷洗净后，每次用100mL乙酸乙酯，振荡提取2次，提取液中加入无水硫酸钠脱水，滤去无水硫酸钠后，40℃以下浓缩，除去溶剂。
残留物中加入30mL正己烷，每次用30mL正己烷饱和乙腈，振荡提取3次。乙腈层在40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入3mL丙酮，完全溶解后，加入7mL正己烷混合。
② 水果和蔬菜
称取20.0g样品，加入100mL丙酮，均质3分钟后，抽滤。取出滤纸上残留物，加入50mL丙酮均质，按上述同样过滤。合并所得的滤液，40℃以下浓缩至约30mL。
加入100mL 10％氯化钠溶液，用100mL正己烷洗净后，每次用100mL乙酸乙酯，振荡提取2次，提取液中加入无水硫酸钠脱水，滤去无水硫酸钠后，40℃以下浓缩，除去溶剂。
残留物加30mL正己烷和30mL正己烷饱和的乙腈，振荡提取3次。分取乙腈层在40℃以下浓缩除去溶剂。残留物中加入3mL丙酮，完全溶解后，加入7mL正己烷混合。
③ 茶
称取5.00g样品，加入20mL水，放置2小时。加入100mL 丙酮，均质3分钟后，抽滤。取出滤纸上残留物，加入50mL丙酮均质，按上述同样过滤。合并所得的滤液，40℃以下浓缩至约30mL。
加入100mL 10％氯化钠溶液，用100mL正己烷洗净后，每次用100mL乙酸乙酯，振荡提取2次，提取液中加入无水硫酸钠脱水，滤去无水硫酸钠后，滤液中加入乙酸乙酯，准确至250 mL。取其50 mL40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入3mL丙酮，完全溶解后，加入7mL正己烷混合。
2）净化方法
① 硅胶柱色谱法
在色谱管（内径15mm）中注入10g悬浮在正己烷中的柱色谱用硅胶（粒径63～200μm），其上再填充5g无水硫酸钠。柱中注入1）所得的溶液后，注入用50mL丙酮：正己烷(3：7)混合溶液，舍弃流出液。再用100 mL丙酮：正己烷(1：1)混合溶液，溶出液在40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入5mL乙酸乙酯溶解。
② 苯磺酰基丙基甲硅烷基化硅胶柱层析法
苯磺酰基丙基甲硅烷基化硅胶小柱(1000mg)中顺次注入5mL甲醇和5mL乙酸乙酯，舍弃流出液。柱中注入①所得的溶液后，再注入5mL丙酮，舍弃流出液。再注入10mL甲醇，溶出液在40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入5mL乙酸乙酯溶解。
③ 中性氧化铝柱色谱法
中性氧化铝小柱(1710 mg)中注入5mL乙酸乙酯，舍弃流出液。柱中注入②所得的溶液后，注入10mL乙酸乙酯，舍弃流出液。再注入20mL丙酮，溶出液在40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入水：甲醇（7：3）混合溶液溶解。谷类、豆类和种子类样品准确至2mL，水果及蔬菜类样品准确至4mL，茶样准确至2mL作为试验溶液。
5．标准曲线的制作
用水：甲醇(7：3)混合溶液将噻虫胺标准品配制0.025～0.5mg/L溶液数点，分别注入20μL 于HPLC中，用峰高法或峰面积法绘制成标准曲线。
6．定量
注入20μL试验溶液于HPLC中，根据5的标准曲线求得噻虫胺的含量。
7．测定条件
1）HPLC
检测器：UV（波长：265nm）。
柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm），内径4.6mm、长250mm。
柱温：40℃
流动相：水：甲醇 （ 7：3）混合溶液。
保留时间标准：约15分钟。
2）LC/MS
柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm），内径2.1mm、长150mm。
柱温：40℃。
流动相：5分钟内将乙腈：0.01%甲酸溶液的混合溶液，从(1：9) 运行到（1：1）浓度梯度，在（1：1）下保持5分钟后，再在(9：1)下保持5分钟。
离子化方式：ESI。
主离子(m/z)：正离子250。
进样量：4μL。
保留时间标准：约11分钟。
8．定量限
0.005mg/kg（茶：0.05 mg/kg）
9．注意事项
1）检测方法概述
本方法用丙酮从样品中提取噻虫胺，正己烷洗净后，乙酸乙酯转移提取。对于水果、蔬菜、茶，保持原状；对于谷类、豆类、种子类，乙腈/正己烷分配脱脂后，经硅胶柱、苯磺酰基丙基甲硅烷基化硅胶小柱、中性氧化铝小柱净化，HPLC/UV定量，LC/MS确证。
2）注意点
① 豆类等在用正己烷洗净、乙酸乙酯转移提取和乙腈/正己烷分配时，容易产生乳化，导致回收率偏低，应避免激烈振荡。
② 硅胶柱色谱法时，如果样品注入小柱前的残留物不溶于丙酮：正己烷(3: 7)混合溶液，有必要在丙酮溶解完全后，加入正己烷。
③试样中杂质少时可以省略硅胶柱色谱法净化。
④ LC/MS测定时，当噻虫胺流出后，应提高流动相中乙腈比例使柱中残留的杂质溶出，避免造成离子化危害。
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