己烯雌酚的测定方法 |
| 作者： 更新时间：2008-3-3 18:15:10 |
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| 畜禽肉中己烯雌酚的测定方法 GB/T 14931.2—1994 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用高效液相色谱(HPLC)方法测定畜禽肉中己烯雌酚残留。 本标准适用于新鲜鸡肉、牛肉、猪肉、羊肉中己烯雌酚残留量测定。最小检出限1.25ng(取样5g时，最小检出浓度0.25mg/kg)。 2 原理 样品匀浆后，经甲醇提取过滤，注入HPLC柱中，经紫外检测器鉴定。于波长230nm处测定吸光度同条件下绘制工作曲线，己烯雌酚含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，样品与工作曲线比较定量。 3 试剂 使用的试剂一般系分析纯，有机溶剂需过0.5?mFH滤膜，无机试剂需过0.45µm滤膜。 3.1 甲醇 3.2 0.043mol/L磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)取1g磷酸二氢钠溶于水成500mL。 3.3 磷酸 3.4 己烯雌酚(DES标准溶液：精密称取100mg己烯雌酚(DES)溶于甲醇，移入100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES1.0mg，贮于冰箱中。 3.5 己烯雌酚(DES)标准使用液：吸取10.00mL DES贮备液，移入100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES100?g。 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪：具紫外检测器。 4.2 小型绞肉机。 4.3 小型粉碎机。 4.4 电动振荡机。 4.5 离心机。 5 操作方法 5.1 提取及净化 称取5g(±0.1g)绞碎(小于5mm)肉样品，放入50mL具塞离心管中，加10.00mL甲醇，充分搅拌，振荡20min，于3000r/min离心10min，将上清液移出，残渣中再加10.00mL甲醇，混均后振荡20min，于3000r/min离心10min，合并上清液，此时出现混浊，需再离心10min，取上清液过0.5?mFH滤膜，备用。 5.2 色谱条件 5.2.1 紫外检测器检测波长230nm。 5.2.2 灵敏度：0.04AUFS。 5.2.3 流动相：甲醇∶0.043mol/L磷酸二氢钠；70/30，用磷酸调pH＝5(其中NaH2PO4·2H2O水溶液需过0.45µm滤膜)。 5.2.4 流速：1mL/min。 5.2.5 进样量：20?L。 5.2.6 色谱柱：CLC－ODS－C18(5?m)6.2mm×150mm不锈钢柱。 5.2.7 柱温：室温。 5.3 工作曲线绘制 称取5份(每份5.0g)绞碎的肉样品，放入50mL具塞离心管中，分别加入不同浓度的标准液(6.0，12.0，18.0，24.0µg/mL)各1.0mL，同时做空白。其中甲醇总量为20.00mL，使其测定浓度为0.00，0.30，0.60，0.90，1.20µg/mL，按5.1处理方法提取备用。 5.4 测定 分别取样20µL，注入HPLC柱中，可测得不同浓度DES标准溶液峰高，以DES浓度对峰高绘制工作曲线，同时取样液20µL，注入HPLC柱中，测得的峰高从工作曲线图中查相应含量，Rt＝8.235。 5.5 计算 式中：X——样品中己烯雌酚含量，mg/kg； A——进样体积中己烯雌酚含量，ng； m——样品的质量，g； V2——进样体积，µL； V1——样品甲醇提取液总体积，mL。 |
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