气相色谱法内标法测定紫苏子油中α-亚麻酸的含量 |
| 作者：中国标准物质网 更新时间：2007-11-29 17:16:30 |
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摘要：目的 对紫苏子油中的α-亚麻酸进行定量分析。方法：采用化学方法提取紫苏子油，后经气相色谱/质谱（GC/MS）法进行定量分析。结果：表明α-亚麻酸的含量达到72.90%。结论：α-亚麻酸具有降血脂，降血压和抗癌等生物功能，为α-亚麻酸的应用提供了重要的依据。
关键词：气相色谱（GC）；α-亚麻酸；紫苏子内标法；气相色谱/质谱（GC/MS）
紫苏子为唇形科植物紫苏的干燥成熟果实。广泛分布在江苏、湖北、广东、广西、河南、河北等地。具有解肌发表、疆散风寒、行气宽中、消痰利肺等药用功效。新近研究表明，紫苏子是目前最富含有α-亚麻酸的植物资源。α-亚麻酸为w-3系列，多烯不饱和脂肪酸。由于该不饱和脂肪酸不能自身合成，必须靠食物供给，故被称为必需脂肪酸。因此近年来受到世界各国医药界的普遍重视。据报道α-亚麻酸在人体内可生成具有显著生理活性的EPA和DHA而发挥作用，主要表现在降血脂、降血压和抗血栓形成等方面具有特殊的作用，实验结果表明，紫苏子油中α-亚麻酸的含量高达72.90%，而我国紫苏子具有丰富的资源，且中草药具有价格低廉的特点，本实验为α-亚麻酸的来源具有客观的经济价值。
1 仪器、实验条件及试剂
1.1仪器：美国PE公司气相色谱/质谱联用仪。日本岛津气相色谱仪。
1.2.1 气相条件：Rtx-5空心石英毛细管柱（WCOT）30m×0.25mm×0.25m，进样量1Μl，分流进样，分流比30：1，载气为N2，柱前压112Kpa，检测器为FID，空气39Kpa，氩气30mL/min，进样口和检测器温度270℃，采用程序升温法：起始温度130℃，以后、10℃/min的速度升温后，维持20min；以5℃/min速度升温至220℃，再以10℃/min升至285℃，并维持该温度5min。
1.2.2质谱条件：载气为氦气，柱前压49Kpa，其他条件同GC。传输线温度250℃，电离室温度：200℃，电离方式EI，电离电压70eV，加速电压6kV，扫描范围20～380amu。
1.3.试剂：紫苏子购于中药店。15种脂肪酸甲酯对照品均为Sigma公司产品，所用试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1样品的提取：将粉碎的紫苏子80g于挥发油提取器中提取，得到紫苏子油，收率为29.50%。
2.2 样品的甲酯化：紫苏子油及脂肪酸对照品甲酯化，取甲酯化的未酯化样品（1mg/mL）各取10μL，分别点于同一硅胶G-薄层板上，再以石油醚-乙醚-乙酸（10：30：2）展开，碘蒸汽显色。结果：甲酯化的亚油酸Rf=0.60，未酯化的紫苏子油Rf=0.33，说明酯化比较完全。
3.3紫苏子油脂肪酸组分的GC/MS鉴定：以正己烷为溶剂，将甲酯化紫苏子油脂肪酸配成10μg/μL的样品液。另取14种脂肪酸甲酯对照品，用正己烷制备成标准混合液，各标准品浓度均为330ng/Μl。取0.5μL进样分析。经气相色谱/质谱技术，以标准脂肪酸甲酯作对照，并经谱库检索，紫苏子油中含有6种脂肪酸，分别为：软酯酸（16：0）；亚油酸（18：2）；α-亚麻酸（18：3）；硬脂酸（18：0）；花生-烯酸（20：1）；花生酸（20：0）。
2.4 GC内标法定量测定α-亚麻酸
2.4.1 确定内标：根据对照品和紫苏子油脂肪酸甲酯的总离子流色谱图，紫苏子油脂肪酸组分中不含十九烷酸（19：0），并且十九烷酸（19：0）与α-亚麻酸（18：3）较接近，故选十九烷酸为内标，并将紫苏子油脂肪酸与内标混合液分别进样，进行GC分析。
2.4.2 标准曲线的制作：各取不同浓度梯度的α-亚麻酸标准液（0.25、0.5、1、2、4μg/μL）等比例混合，各取混合液1μL，按GC条件进行测定，绘制标准曲线，在0.125～2.000μg/μL范围内，呈良好线性。回归方程为：Y=-0.0235+1.0541X，r2=0.9830
2.4.3 紫苏子油中α-亚麻酸含量的测定：取甲酯化紫苏子油样品（2mg/mL）与内标液（2mg/mL）等比例混合，取1μL进样分析，样品测定三次，求均值。α-亚麻酸在紫苏子油中含量为72.90%，RSD=1.7%。因为样品是经过甲酯化后进行色谱分析，在计算α-亚麻酸含量时，要将α-亚麻酸甲酯乘以系数0.952，该系数是α-亚麻酸分子量与α-亚麻酸甲酯分子量之比。
3 讨论
气相色谱法分析紫苏子油中脂肪酸的含量有一定的难度，主要原因是由于α-亚麻酸含量较高，不易与其相邻的峰达到基线分离。为能准确测定α-亚麻酸的含量，提高柱效，改善分离度，我们用空心石英毛细管柱，并采用程序升温的方法，得到的结果良好，测定结果表明，紫苏子油中α-亚麻酸的含量高达72.90%（RSD=1.7%）。
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