空气中苯并〔a〕芘的测定主要是高效液相色谱法。检测器可用紫外检测器，也可用荧光检测器。
L.1 相关标准及依据
本方法主要依据GB/T15439 《环境空气 苯并[a]芘测定高效液相色谱法》。
L.2 测定范围
用大流量采样器（流量为1.13m3/min）连续采集24h，乙腈/水做流动相，B[a]P最低检出浓度为6×10-5μg/m3；甲醇/水做流动相，B[a]P最低检出浓度为1.8×10-4μg/m3。
L.3 试剂和材料
L.3.1 乙腈：色谱纯。
L.3.2 甲醇：优级纯，用微孔孔径小于0.5μm的全玻璃砂芯漏斗过滤，如有干扰峰存在，需用全玻璃蒸馏器重蒸。
L.3.3 二次蒸馏水：用全玻璃蒸馏器将一次蒸馏水或去离子水加高锰酸钾KMnO4（碱性）重蒸。
L.3.4 超细玻璃纤维滤膜：过滤效率不低于99.99%。
L.3.5 B[a]P标准贮备液（1.00μg/μL）：称取10.0±0.1mg色谱纯B[a]P，用乙腈溶解，在容量瓶中定容至 10mL。 2℃ ～5 ℃避光保存。
L.4 仪器
L.4.1 超声波发生器：250W。
L.4.2 采样器：符合GB6129（附录J）要求的大流量采样器（1.1～1.7 m3/min）。
L.4.3 离心机：6000r/min。
L.4.4 具塞玻璃刻度离心管：5 mL。
L.4.5 高效液相色谱仪：备有紫外检测器。
L.4.6 色谱柱
L.4.6.1 色谱柱类型：反相，C18柱，柱子的理论塔板数＞5000。
L.4.6.2 柱效计算公式：用半峰宽法计算。
式中：
N——柱效，理论塔板数；
Tr——被测组分保留时间，s；
W1/2——半峰宽，s。
L.5 样品
L.5.1 样品采集方法
采样前超细玻璃纤维滤膜的处理：500℃马弗炉内灼烧半小时。其他注意事项及采样方法见GB6921（附录J）。
L.5.2 样品贮存方法
将玻璃纤维滤膜取下后，尘面朝里折叠，黑纸包好，塑料袋密封后迅速送回实验室，-20℃以下保存，7d内分析。
L.5.3 样品的处理
先将滤膜边缘无尘部分剪去，然后将滤膜等分成n份，取1/n滤膜剪碎入5mL具塞玻璃离心管中，准确加入5mL乙腈，超声提取10min，离心10min，上清液待分析测定。
L.5.4 在样品运输、保存和分析过程中，应避免可引起样品性质改变的热、臭氧、二氧化氮、紫外线等因素的影响。
L.6 操作步骤
L.6.1 调整仪器
柱温：常温。
流动相流量：1.0mL/ min。
流动相组成：乙腈/水：线性梯度洗脱，组成变化按下表：
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时间，min
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溶液组成
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0
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40%乙腈/60%水
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25
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100%乙腈
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35
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100%乙腈
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45
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40%乙腈/60%水
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甲醇/水：甲醇/水=85/15。
检测器：紫外检测器测定波长254nm。
记录仪：根据样品中被测组分含量调节记录仪衰减倍数，使谱图在记录纸量程内。
分析第一个样品前，应以1.0 mL/ min流量的流动相冲洗系统30 min以上，检测器预热30 min以上。
检测器基线稳定后方能进样。
L.6.2 校准
L.6.2.1 标准工作液：先用乙腈将贮备液稀释成0.100μg/μL的溶液，然后用该溶液配制三个或三个以上浓度的标准工作液。标准工作液浓度的确定应参照飘尘样品浓度范围，以样品浓度在曲线中段为宜。2℃ ～5 ℃避光保存。
L.6.2.2 用被测组分进样量与峰面积（或峰高）建立回归方程，相关系数不应低于0.99，保留时间变异在±2%。
L.6.2.3 每天用浓度居中的标准工作液（其检测数值必须大于10倍检测限）作常规校正，组分响应值变化应在15%之内，如变异过大，则重新校准或用新配制的标样重新建立回归方程。
L.6.2.4 空白试验：每批样品或试剂有变动时，都应有相应的空白试验。空白样品应经历样品制备和测定的所有步骤。
L.6.3 试验
L.6.3.1 进样
L.6.3.1.1 进样方式：以微量注射器人工进样或自动进样器进样。
L.6.3.1.2 进样量：10～40 μL。
L.6.3.1.3 操作（人工进样）：先用待测样品洗涤针头及针筒三次，抽取样品，排出气泡，迅速按高效液相色谱进样方法进样，拔出注射器后用流动相洗涤针头及针筒二次。
L.63.1.4 样品浓度过低，无法正常测定时，可于常温下吹入平稳高纯氮气将提取液浓缩。
L.6.4 色谱图的考察
L.6.4.1 定性分析
L.6.4.1.1 以样品的保留时间和标样相比较来定性。
L.6.4.1.2 鉴定的辅助方法：被测组分较难定性时，可在提取液中加入标液，依据被测组分峰的增高定性。
L.6.4.2 定量分析
L.6.4.2.1 用外标法定量。
L.6.4.2.2 计算：
式中：
ρ——室内空气可吸入颗粒物中B[a]P浓度，μg/m3；
W——注入色谱仪样品中B[a]P量，ng；
Vt——提取液总体积，μL；
Vi——进样体积，μL；
Vs——标准状态下采气体积，m3；
1/n——分析用滤膜在整张滤膜中所占的比例。
L.7 结果的表示
L.7.1 定性结果
根据标准溶液色谱图保留时间进行样品中B[a]P的鉴定。
L.7.2 定量结果
L.7.2.1 含量的表示方法
按上述公式算出室内空气可吸入颗粒物中B[a]P的含量，以μg/m3表示。
L.8 方法特性
L.8.1 精密度
L.8.1.1 重复性
乙腈/水流动相：飘尘样品5次测定，测定值为 0.0098～0.0108 μg/m3，B[a]P变异系数为4.3%。
甲醇/水流动相：飘尘样品5次测定，测定值为 0.0034～0.0039 μg/m3, B[a]P变异系数为5.2%。
L.8.1.2 再现性
乙腈/水流动相：飘尘样品5个实验室测定，测定值为 0.0032～0.0037 μg/m3, B[a]P变异系数为6.2%。
甲醇/水流动相：飘尘样品5个实验室测定，测定值为 0.0027～0.0035 μg/m3, B[a]P变异系数为9.7%。
L.8.2 准确度
乙腈/水流动相：加标飘尘样品回收率为93%～99%。
甲醇/水流动相：加标飘尘样品回收率为94%～99%。
L.8.3 检测限
乙腈/水流动相：按检测值在2倍噪音值以上为有效值计算，B[a]P最小检测限为10-10g。
甲醇/水流动相：按检测值在2倍噪音值以上为有效值计算，B[a]P最小检测限为3×10-10g。
L.9 注意事项
苯并[a]芘是致癌物，操作时应保持最低限度接触，必要时可戴防有机溶剂手套。废液应收集起来，统一处理。实验所用玻璃仪器用重铬酸钾洗液浸泡洗涤。 |