一 定量依据

色谱定量分析是根据检测响应信号大小，测定试样中各组分的相对含量。定量分析的依据是每个组分的量（质量或体积）与色谱检测器的响应值成正比，一般与峰高或峰面积响应成正比。每个色谱峰高（h)可从色谱图直接测定。色谱峰面积（A）以峰高与半峰高宽（2△X_l/2）相乘求出。

A=h×2△X _1/2

通常色谱峰高反比于色谱峰宽度，峰宽度正比于保留时间。在试样和标样平行分析时，必须严格控制柱温、流动相流速、进样速度等色谱操作条件以不改变峰宽，才能获得准确的峰高测定结果。操作条件对峰面积的影响比峰高小。一般保留值小、峰宽窄且难以准确测量的组分，可按峰高定量。多数情况下按峰面积定量为宜。

色谱仪器配置的数字积分仪或色谱工作站可直接提供色谱峰高、峰面积等定量数字化信息并可按下述不同定量方法给出各组分定量数据，其准确度一般高于手工测量。

二 定量方法

（一）标准校正法或外标法

最直接的定量方法是配制一系列组成与试样相近的标准溶液。按标准溶液色谱图，可求出每个组分浓度或量与相应峰面积或峰高校准曲线。按相同色谱条件下试样色谱图相应组分峰面积或峰高，根据校准曲线可求出其浓度或量，是应用最广、易于操作、计算简单的定量方法。这是一个绝对定量校正法，标样与测定组分为同一化合物，分离、检测条件的稳定性对定量结果影响很大。为获得高定量准确性，定量校准曲线经常重复校正是必须的。在实际分析中，可采用单点校正。只需配制一个与测定组分浓度相近的标样，根据物质含量与峰面积成线性关系，当测定试样与标样体积相等时：

mi=（ms/As）Ai=fiAi                                                    （1-1）

式中mi,ms为试样和标样中测定化合物的质量，Ai,As为相应峰面积。单位峰面积相应化合物量的比例系数fi称为组分i的定量校正因子。单点校正操作上要求定量进样或已知进样体积；标样和测定试样在同一色谱分离、检测条件下分析；测定成分与试样中其他组分分离且有检测响应，对于不要求定量测定的组分可不作此要求。

（二）内标法

选择一个一般不存在试样中的合适内标化合物。要求内标物是高纯化合物；与试样中各组分很好分离，且不与组分发生化学反应；分子结构、保留值与检测响应最好与待测组分相近。

内标法是一个相对定量校正法，分离、检测条件对定量结果影响不如外标法敏感。首先需测定待测组分、内标物对某一标准物的相对定量校正因子。组分i的相对定量校正因子f’i定义为组分定量校正因子与标准物定量校正因子之比。

f’i=（mi/Ai）/（ms/As）                                                                  （1-2）

式中mi,ms为组分i和标准物s的质量，Ai,As为相应峰面积。类似地，内标物的相对定量校正因子f’is，为

f’is＝（mis/Ais）/（ms/As）

式中mis,Ais为内标物质量和峰面积。

合并式（1一1)、式（1-2）得

mi=（Aif’i/Aisf’is）mis

当称取试样质量为m，加入内标物质量为mis,测定组分的含量ωi为

ωi=mi/m×100%＝（Aif’i/Aisf’is）×（mis/m）×100%

若测定相对定量校正因子的标准物与内标物为同一化合物，则f’is=1，得

ωi＝mi/m×100％＝（Aif’i/Ais）×（mis/m）×100％

内标法可获得高定量准确度，因为不需定量进样，可避免定量进样带来的某些不确定因素。特别适用于测定含量差别很大的各组分，及除待测组分外有些组分未能洗出或有些组分在检测器上没有响应的试样。

（三）峰面积归一化法

试样中所有组分全部洗出，在检测器上产生相应的色谱峰响应，同时已知其相对定量校正因子，可用归一化法测定各组分含量。

ωi＝mi/m1+m2+…+mi+…+mn=Aif’i/∑Aifi×100％

归一化法不必称样和定量进样，可避免由此引起的不确定因素。分离条件在一定范围内对定量准确度影响较小，适用于多组分同时定量测定。但在合理时间内全部组分洗出，并已知定量校正因子，其实际应用受一定限制。若组分相对定量因子相近，如气相色谱氢火焰离子化检测器测定烃类化合物；高效液相色谱紫外检测器测定苯的单取代衍生物或摩尔吸光系数和相对分子质量相近的化合物，未校正的峰面积归一化法测定各组分的相对近似含量，亦有一定实用价值。