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微径柱高效液相色谱

发布时间:2015-08-12 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:900

微径柱(microborecolumn)一般指内径1-2mm细内径填充柱和内径<1mm的毛细管填充柱、整体柱和开管柱。早在HPLC发展初期,即20世纪60年代,就已研究内径0.5mm,长lm的毛细管HPLC。微径柱色谱已成为统一的高分离度色谱方法,包括毛细管气相色谱、超临界流体色谱、微柱高效液相色谱(Micro-HPLC,μ-HPLC,Nano-HPLC)。它们在基本原理、仪器和操作技术,如进样、柱技术、检测器、仪器组件等多方面相似;毛细管柱均多采用内径50-300μm弹性石英管。随着柱和检测技术发展,统一的微柱色谱方法将提供未知试样丰富色谱信息。

与常规分析HPLC比较,微柱高效液相色谱显示一系列优点:(1)由于柱长和柱效之间存在线性关系,可采用较长色谱柱(≧2m),高压泵输液1000大气压以上,可获得每米数105-106高理论塔板的超高柱效;但通常大内径色谱柱未观察到这种线性关系;高压能获得高线速,可实现快速分离。(2)较小柱体积,柱填料可比常规分析柱节省100-600倍。较低体积流速,导致低溶剂消耗,降低成本和减少环境污染。内径0.5mm毛细管柱和1mm微径柱分别为4.6mm常规柱((1mL·min-1体积流速)获得相同线速度条件下溶剂消耗的0.012%和5%。(3)分离洗脱较小的峰体积,导致浓度敏感检测器(紫外、荧光、ESI-MS)有较高的响应,大大降低最低检出限。进同样量试样时,0.5-0.075mm内径毛细管柱可比4.6mm常规柱提高灵敏度2-3数量级。(4)石英毛细管柱内壁易于化学改性,降低溶质与管壁作用,提高柱效和选择性。

现代通用HPLC仪器有些具有微柱高效液相色谱功能,但常需分流或更换输液泵泵体、检测池才能与微径柱匹配。微柱专用高效液相色谱仪器微机械加工技术要求更高,各种组件与微径柱匹配,可获得优化分离测定条件。这类商品色谱仪采用脉动流量自动校正和高速驱动、微体积双柱塞高压输液泵,液缸体积为微升级(约50-250μL),柱前压可达500×105Pa以上,流速50×106一5mL·min-1范围内精度约为0.3%。进样方式采用一般六通阀进样分流(分流比约1/10-1/100)或定时切换取样,如装0.5μL取样管,流动相流速5μL·min-1,取样(load)1s切换至进样,进样为83nL。现已有商品微体积六通进样阀(microinjector),进样体积在纳升范围可变。微径柱多采用匀浆装柱,毛细管填充柱、整体柱与电色谱柱制备方法相同,填料1.5-3μm。开管柱内壁改性、固定化与气相色谱柱制备方法相似。检测方式,若为光学检测器,对石英毛细管柱,一般采用在线检测,即将色谱柱出口端装在检测光路固定支架上。现已有微型池检测器,池体积为数微升或更小,如4-8μL或50一500nL;光程长为数毫米。

微径柱液相色谱具有高灵敏度、高通量分离能力,适用于多组分复杂混合物的分离分析。炭黑萃取稠环芳烃混合物分离色谱图,质谱鉴定表明组分为相对分子质量从202-450的含4-10苯环不同结构稠环芳烃,但还未能对所有组分作出鉴定。微径柱液相色谱最主要应用是与质谱、核磁共振波谱联用,获取各种分子群的结构信息,在蛋白质组学、药物代谢组学、天然产物和食品安全等领域应用。另一个是多维色谱技术中的应用,如μ-HPLC/毛细管GC,μ-HPLC/SFC,μ-HPLC/μ-HPLC多维分离,提供试样高分离前的纯化、预分离、预浓缩等。

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