1979年Switzer和Merril等首先介绍了银染色的方法，其灵敏度比考马斯亮蓝染色高约50-100倍。然而，不同蛋白质间的染色反应差异较大。下述方法基于ExPASy SWISS -2D聚丙烯酰胺凝胶的方法，并已对其进行了优化，可在明亮的背景上得到均一的棕褐色斑点，便于图像获取和定量比较。然而，这种方法不适于应用质谱对蛋白质进行检测。

注意：在本方法中应当用PDA（二丙烯酰哌嗪；piperazine-diacry-lyl)作为交联剂灌制聚丙烯酰胺凝胶，以使凝胶在碱性pH的氨硝酸银( ammoniacal silver nitrate）溶液中更加稳定。凝胶中含有5 mmol/L的硫代硫酸钠，以降低凝胶的背景。

材料：

含有目的蛋白的聚丙烯酰胺凝胶

固定液A: 40% (V/V）乙醇/10% (V/V）乙酸

固定液B: 5% (V/V）乙醇/5% (V/V）乙酸

0. 5 mol/L醋酸钠／1%（V/V）戊二醛

0.05%（W/V) 2，7-萘二磺酸（2，7-naphthalene disulfonic acid)

终止液：5% (W/V) Tris碱，含2% (V/V）乙酸

带盖的玻璃或塑料容器，大小适合于盛放凝胶

台式摇床

注意：氨硝酸银溶液一旦干燥便会发生爆炸，用后应随即加入1mol/L HCl，使银形成氯化银沉淀，并按照当地的法规进行废弃处理。

1) 从电泳槽中取下凝胶，置于含有去离子水的玻璃或塑料容器中。在台式摇床上持续、缓慢地摇动5 min，冲洗凝胶。

由于氨硝酸银能与皮肤的蛋白质反应，因此在处理所有材料时，要戴上用去离子水彻底冲洗过的手套。

特别注意：在操作以下所有反应时，均在台式摇床上持续缓慢地摇动。

2）真空抽吸除去水，按下列顺序进行固定：

在10-20倍凝胶体积的固定液A中固定1 h;

在10-20倍凝胶体积的固定液B中固定2h-过夜；

用10-20倍凝胶体积的去离子水洗涤5 min;

在5-10倍凝胶体积的0. 5 mol/L醋酸钠／1％戊二醛中固定30 min

注意：戊二醛具有刺激性，应戴手套并在通风橱中配制溶液。

3）小心地吸出戊二醛溶液，在10-20倍凝胶体积的去离子水中洗胶3次，每次10 min

4）吸去水，在5-10倍凝胶体积的0.5% 2, 7-萘二磺酸中温育凝胶2次，每次30 min

5）吸去溶液，在10-20倍凝胶体积的去离子水中冲洗凝胶4次，每次15 min。

6）吸去水，将凝胶在5-10倍凝胶体积的新鲜配制的氨硝酸银溶液中染色30 min。

7）吸去银染色液，将凝胶在10-20倍凝胶体积的去离子水中洗涤4次，每次4 min。

8) 吸出水，将凝胶在5-10倍凝胶体积的柠檬酸显影液中显影5-10 min，直到有轻微的背景染色出现，而且条带呈现均一的棕色，注意不要显影过度。当凝胶要用于定量比较时，要使用完全相同的染色条件和显影条件。

9）快速地除去柠檬酸液，将凝胶在10-20倍凝胶体积的终止液中温育30 min。

10）除去终止液，将凝胶在10-20倍凝胶体积的去离子水中冲洗30min。

11）显影后（24 h以内），马上用平板扫描仪扫描凝胶。扫描后，将凝胶置于可密封的塑料袋中，4℃保存。