北京普天同创生物科技有限公司
使用标准波长302 nm的紫外透射仪或有适当激发和发射滤光片的凝胶成像系统,能观察到SYPRO Ruby,最大激发和发射波长分别是450 nm和610 nm。SYPRO Ruby染色法的灵敏度可与大多数银染色法相媲美,这取决于所用的成像方法。
材料:
含有目的蛋白的聚丙烯酰胺凝胶
固定液:40% (V/V)甲醇/10% (V/V)乙酸,用水配制
SYPRO Ruby蛋白质凝胶染色液(Molecular Probes公司)
脱色液/洗涤液:2% (V/V)乙酸
2% (W/V)甘油(可选)
带盖的玻璃或塑料容器,大小适合于盛放凝胶
台式摇床
1) 从电泳槽中取下凝胶,置于塑料容器中,容器内装有10倍以上凝胶体积的固定液。盖上盖子,在台式摇床上缓慢、持续地摇动1 h,以固定凝胶。
2) 真空抽吸移去染色液,在10倍凝胶体积的SYPRO Ruby染色原液中温育凝胶3h-过夜,并轻轻摇动。
3)将凝胶在10倍凝胶体积的脱色液/洗涤液中浸泡30 min(或过夜)。
4)将凝胶扫描或照相。如果需要,凝胶可在脱色液/洗涤液中4℃避光保存数天。要保存更长的时间,可把凝胶放入2%的甘油中浸泡30min,然后在干胶仪上干燥。
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