O-G1cNAc转移酶活性最初是在兔网织红细胞裂解液中发现的，后来证实在兔网织红细胞裂解液中表达的蛋白经过O-G1cNAc修饰。这一发现已经被用来筛选低拷贝或需纯化蛋白是否存在糖基化修饰。

(1）材料

1) cDNA克隆至含有SP6或T7启动子的表达载体（约0.5-1. 0μg/μl)。

2）兔网织红细胞裂解液体外转录翻译试剂盒（Promega, Madison,WI)。

3）标签，35S-Met、35 S-Cys或14C-Leu。

4) sWGA-琼脂糖（Vector Labs, Burlingame, CA)。

5）Bio-Spin一次性层析柱（Bio-Rad，Hercules，CA)。

6）葡聚糖凝胶G 50。

7）磷酸盐缓冲液（PBS) : 10mmol/L phosphate buffer, pH 7.5;150mmol/L NaCl。

8) sWGA洗液：PBS; 0.2% (V/V) NP-400

9) sWGA半乳糖洗脱液：PBS；0.2%（V/V) NP-40；1. 0mol/LD-（＋）-半乳糖。

10) sWGA N-乙酰半乳糖苷洗脱液：PBS; 0. 2% (V/V) NP -40；1. 0mol/L G1cNAc。

11）SDS-PAGE平衡液、缓冲液。

12）真空干胶仪。

13）液体闪烁计数器。

(2）方法 兔网织细胞裂解液中蛋白合成：

1) 按照厂家说明书，利用兔网织细胞裂解液ITT系统合成蛋白，包括：目的蛋白；结合sWGA的阳性对照（如核孔蛋白p62)，及阴性对照（荧光素酶，试剂盒提供）。

2）己糖胺酶处理一半的样品（对照实验1)。

3）脱盐( Amersham Biosciences MicrospinTM G50脱盐柱或1 ml G50脱盐柱）。

脱盐：

4) Bio-Spin一次性层析柱内，加入1 ml交联葡聚糖G 50。

5) 5m1 sWGA洗脱缓冲液洗柱。

6) 样品过柱（最多可加2000)。

7) sWGA洗液洗柱，洗脱液与样品总量为350μl，如样品为150μl，脱盐缓冲液则加200 μ1。

8) 将柱转至一干净预冷管中，200μl脱盐液洗脱。

sWGA层析：以下步骤4℃进行。

9) sWGA洗液中平衡大约150μ1 sWGA琼脂糖。

10）样品进柱后，4℃静置30min。

11) 弃掉未结合部分。

12) 15ml洗液洗柱，流速l0ml/h，每0. 5 ml收集一管。

13) 500 μ1半乳糖洗脱液加入柱中，4℃静置20分钟。

14) 5ml半乳糖洗脱液洗柱，每0. 5ml收集一管。

15）GlcNAc洗脱液重复步骤5，6。

16）每管取25μl收集液进行流体闪烁计数器计数。

17）收集G1cNAc洗脱部分，TCA或甲醇沉淀。

18) SDS-PAGE和放射自显影分析沉淀，以确认标签已融合入蛋白