肽N-糖苷酶F (PNGase F）消化样品和对照蛋白可有效排除血凝素和半乳糖基转移酶与N-连接聚糖的反应。同时，设立肽N-糖苷酶F反应的阳性对照。

（1) 材料：

1）肽N：糖苷酶F（PNGase F )。

2) 10 ×PNGase F变性缓冲液：5% (W/V) SDS; 10% (V/V) β-巯基乙醇溶于50mmo1/L磷酸盐缓冲液，pH 7. 5。

3) 10×肽N：糖苷酶反应液：500mmol/L磷酸盐缓冲液，pH 7.5。

4) 10%（V/V) NP-40。

5) 蛋白酶抑制剂复合物：亮肽素（1 mg/ml；抗痛素（2mg/ml) ;苯酰胺（l0mg/ml)，溶于抑肽酶（10 000 U/ml)。

(2）方法：

1) 每份样品中加入1/10体积的10×肽N-糖苷酶F变性缓冲液，100℃加热l0min。

2）加入1/10体积的10×肽N-糖苷酶F反应缓冲液，10% (V/V) NP-40混匀。

3）加1.0μl肽N-糖苷酶F, 37℃反应lh至过夜。