苯并[a]芘简称BaP，是一种由五个苯环构成的多环芳烃。分子式为C20H12，分子量为252，结构式如下：

BaP是一种有代表性的强致癌物质，由于它对人体的严重危害，引起了世界各国卫生及环境组织的高度重视，所以它已列为环境污染致癌物检测工作中常规检测项目之一。

水中的BaP以吸附于某些固体颗粒上、溶解于水中和呈胶体状态等三种形式存在。其中大部分吸附在颗粒物质上。它们主要来自洗刷大气的雨水，工业排污和船舶油污等。而以焦化、炼油、沥青、塑料等工业污水含量较高。

检测BaP的方法，一般包括有机溶剂萃取，吸附柱层析分离，薄层分离，再经高压液相色谱法、气相色谱法、荧光分光光度法进行定量测定。由于BaP在水中含量很低，一般都是ppb级，所以采样时要取大量水样进行富集、浓缩、分离后再用上述分析方法测定。本方法采用乙酞化滤纸、纸层析法直接分离BaP，然后再用荧光分光光度计测量，具有分析手续简单、操作方便、污染小、灵敏度高、成本低、适于普及等特点。

水样保存除应在玻璃瓶中避光外，并于当日用环己烷萃取。环己烷萃取液可放入冰箱中保存。

1．方法原理

BaP易溶于环己烷、咖啡因水溶液、苯、三氯甲烷等有机溶剂。本方法将水中BaP等多环芳烃及其它环己烷可溶物萃取到环己烷中，萃取液用无水硫酸钠脱水，K-D浓缩器浓缩，浓缩物经乙酞化滤纸分离。BaP斑点用丙酮溶解后，以荧光分光光度法定量测定。

2．干扰及消除

对含油污水必须用二甲基亚砜(DMSO）去油后才能在纸层析上分离。

3．方法的适用范围

本方法适用于饮用水、地表水、生活污水、工业废水。最低检出浓度为0.004μg/L。对含BaP 0.2μg/L的沥青加工污水回收率可达到80%-93%，相对标准偏差是4％-13%。含BaP 0.1gμ/L的焦化污水回收率73％-120%，相对标准偏差3％-18%。

4．仪器

①具紫外激发和荧光分光的荧光分光光度计，光程为lomm的石英比色皿。

②紫外分析仪（带365nm或254nm滤光片）。

③康氏振荡器。

④磁力恒温搅拌器。

⑤立式离心机转速为4000r/min。

⑥分液漏斗，1L、3L、100ml。活塞上禁用油性润滑剂。

⑦K-D浓缩器。

⑧250m1具塞锥形瓶。

⑨5ml具塞刻度离心管。

⑩恒温水浴锅。

11.层析缸。

12.点样用玻璃毛细管（自制）。

5．试剂

①BaP标准溶液的配制：准确称取约5.00mg固体标准BaP于50m1容量瓶中，用少量苯溶解后，加环己烷定容至标线，其浓度为l00μg/ml。将此贮备液用环己烷稀释成l0μg/ml,避光贮于冰箱中。

注意：BaP是一种由五个环构成的多环芳烃，它是多环芳烃类的强致癌代表物。因此实验中必须戴抗有机溶剂的手套，操作应在搪瓷盘中进行（如溶液转移、定容、点样等）。室内应避免阳光直接照射，通风良好。

②乙酰化滤纸的制备：把15cm×30cm的层析滤纸15-20张，松松卷成高15cm圆筒状，逐张放入1000m1高型烧杯中，杯壁与靠杯第一张纸间插入一根玻璃棒，杯中间放一枚玻璃熔封的电磁搅拌铁芯。在通风橱中，沿杯壁慢慢倒入乙酰化剂（750m1苯，250ml乙酸酐，0.5ml硫酸混合液），在磁力恒温搅拌器上保持50℃±1℃，连续反应6h，取出乙酰化滤纸，用自来水漂洗3-4次，再用蒸馏水漂洗2-3次，晾干。次日用无水乙醇浸泡4h，取出乙酞化滤纸，晾干压平，备用。

③环己烷，分析纯，重蒸用荧光分光光度计检查：在荧光激发波长367nm，狭缝l0nm;荧光发射狭缝2nm，波长405nm处应无峰出现。

④丙酮，分析纯，重蒸。

⑤甲醇，分析纯。

⑥乙醚，分析纯。

⑦苯，分析纯，重蒸。

⑧乙酸配，分析纯。

⑨硫酸，分析纯，ρ=1.84g/ml。

⑩无水硫酸钠，分析纯。

⑨二甲基亚砜(DMSO )：用前只用环己烷萃取两次（(500m1二甲基亚砜加50m1环己烷萃取）。弃去环己烷后备用。

6．步骤

(1) 样品预处理

①取均匀的水样于分液漏斗中（清洁水和地表水取2000m1于3000m1分液漏斗中，工业废水取1000ml于2000m1分液漏斗中），用环己烷萃取两次，每次用50m1。在康氏振荡器上振荡3min，取下放气，静置0.5h，待分层后，收集两次萃取的环己烷于具塞锥形瓶中，弃去水相。

②在环己烷萃取液中加入无水硫酸钠（约20-50g)，静置至完全脱水（约1-2h，至锥形瓶底部无水为止）。如果环己烷萃取液颜色较深，则将脱水后的环己烷定容至100m1,再取其一定体积浓缩。如环己烷萃取液颜色较浅，则全部浓缩。水浴温度控制在70-75℃，用K-D浓缩器减压浓缩近干，用苯洗涤浓缩管管壁三次，每次3滴，再浓缩至0.05ml,以备纸层析用。

③取15cm×30cm预先制备好的乙酰化滤纸，在长30cm的下端3cm处，用铅笔轻轻画一横线，横线两端各留出1.5cm，以2.4cm的间隔将标准BaP与样品浓缩液用玻璃毛细管交叉点样。点样斑点直径不要超过3-4mm。点样过程中用冷风吹干。每个浓缩管洗两次，每次用1滴苯，全部点在纸上。将点过样的层析滤纸挂在层析缸内架上，加入展开剂（甲醇＋乙醚＋蒸馏水=4+4+1)，直到纸上端浸入lcm为止。加盖，用透明胶纸密封，于暗室中展开2-16h（可根据工作安排，灵活选择展开时间）。取出层析滤纸，在紫外分析仪下用铅笔画出标准BaP斑点以及样品中与其高度相同的紫蓝色斑点范围。

④剪下用铅笔圈出的斑点，剪成小条，分别放入5m1具塞离心管中，在105-110℃烘箱中烘l0min（或在干燥器中晾干，也可在清洁空气中晾干）。在干燥器内冷却后，加入丙酮至标线，用手振荡I min后，以3000r/min的速度离心2min。上清液留待测量用。

(2）样品测定

将标准BaP斑点和样品斑点的丙酮洗脱液分别倒入10nmm的石英池中，在激发、发射狭缝分别为10nm和2nm，激发波长为367nm处，测其发射波长402、405、408nm处的相对荧光强度（F)。

7．计算

用窄基线法按下列公式计算出标准BaP和样品中BaP的相对荧光强度（F)，再计算水样中BaP的含量（相对比较计算法）。

F＝F405nm一（F402nm＋F408nm）/2

C＝M·F2/F1·V×R

式中：C一一水样中BaP含量(μg/L) ;

M－一标准BaP点样量（μg);

Fl、 F2－—标准BaP和样品斑点的相对荧光强度；

V一一水样体积（L);

R——环己烷萃取液总体积与浓缩时所取的环己烷萃取液的体积之比值。

8．精密度和准确度

（1) 精密度

五个实验室自行配制的含有BaP约0.2lig/L的焦化废水的精密度。

(2）准确度

两种工业废水的加标回收率。

9．注意事项

①石油、含油污水为去除干扰物需按下述操作进行：将上述100ml环己烷萃取液定容后取出30ml，放入100ml分液漏斗中用二甲基亚砜 (DMSD )（先用环己烷饱和）萃取两次，每次l0ml，手摇2min，注意放气。静置0.5h,待分层后收集两次萃取的DMSO液于另一个l00ml分液漏斗中，弃去环己烷液。于已放入10ml DMSO的100ml分液漏斗中，加入事先用冰冷却过的（1+1) HCl 15ml，冷却至室温，再用环己烷反萃取两次，每次5m1，手摇2min，注意放气。合并两次环己烷萃取液10ml于100ml分液漏斗中，加5ml 15% NaOH溶液洗1次，摇2min，弃去NaOH水相，再用水洗2-3次，直至洗涤后的水pH为7时，弃去水相。将环己烷萃取液加无水硫酸钠脱水后，在K-D浓缩器上浓缩。以下步骤包括乙酞化滤纸层析分离，荧光分光光度法Al量，计算等同上。

②测量后的BaP丙酮洗脱液切勿随意丢弃，可放入通风柜中的专用大烧杯中，统一处理。

③本实验应在避免阳光直接照射下进行。

④所有玻璃器皿必须用洗液浸泡4h以后洗涤。