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多管发酵法——水中粪大肠菌群的测定(B)(一)

发布时间:2015-11-02 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1108

粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分,主要来自粪便。在44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法,造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件,使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群,从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。粪大肠菌群的测定可以用多管发酵法或滤膜法。

多管发酵法

1.培养基

①单倍和三倍乳糖蛋白胨培养液。

②EC培养液。

2.步骤

(1)水样接种量

将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。
相对未受污染的水样接种量为l0ml、1ml、0.1ml。受污染水样接种量根据污染程度接种1m1、0.lml、0.01ml或0.lml、0.0lml、0.00lml等。
如接种体积为l0ml,则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白陈培养液5ml;如接种量为1ml 或少于1ml,则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液l0ml中。

(2)初发酵试验

将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在37℃±0.5℃下培养24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。

(3)复发酵试验

轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管,用3mm接种环或灭菌棒将培养物转接到EC
培养液中。在44.5℃±0.5℃温度下培养24h±2h(水浴箱的水面应高于试管中培养基液面)。接种后所有发酵管必须在30min内放进水浴中。培养后立即观察,发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。

3.计算和报告结果

根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目,从MPN表中查得相应的MPN指数,按总大肠菌群的计算方法计算每升水中粪大肠菌群细菌的MPN值。

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